ms培養(yǎng)基配制方法 new

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1、MS培養(yǎng)基一、大量元素母液1：大量A500ml母液稱?。?0×NH4NO3KNO3MgSO4?7H2OKH2PO441.25g47.5g9.25g4.25g母液2：大量B500ml母液稱?。?00×CaCl2?2H2O或CaCl222g16.6g母液3：Fe鹽1000ml母液稱?。?00×FeSO4?7H2ONa2-EDTA或EDTA-Fe(10mM-100μM)2.78g3.73g4.211g注：配制順序如下1.稱取3.73gNa2-EDTA?2H2O溶解于200ml去離子水中，并置于70℃預(yù)熱(A)；2.稱取2.78gFeSO4?7H2O溶解于20

2、0ml去離子水中(B)；3.將B緩慢倒入A中混合，邊倒邊攪動，置于70℃水浴鍋中螯合2h；4.冷卻后定容至1L。二、微量元素母液4：微量1000ml母液稱取：1000×MnSO4?4H2OZnSO4?7H2OH3BO3KI22.3g8.60g6.20g0.83gNa2MoO4?2H2OCuSO4?5H2OCoCl2?6H2O0.25g0.025g0.025g三、有機(jī)物質(zhì)母液5：有機(jī)（不含肌醇）1000ml母液稱?。?00×鹽酸硫胺素VB1鹽酸吡哆醇VB6煙酸VB3VPP甘氨酸（氨基乙酸）0.01g0.05g0.05g0.2g1L工作液的配制:母液1：大

3、量A母液2：大量B母液3：Fe鹽母液4：微量母液5：有機(jī)肌醇蔗糖20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g定容至1L，用1MNaOH調(diào)pH至5.8，于121℃，高壓滅菌20min。注：配固體培養(yǎng)基可在調(diào)pH后加適量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有機(jī)母液。四、抗生素和激素母液試劑名稱配制方法母液濃度Amp（氨芐青霉素）雙蒸水溶解，定容，過濾滅菌50mg/mlKm（卡那霉素）雙蒸水溶解，定容，過濾滅菌50mg/mlStr（鏈霉素）雙蒸水溶解，定容，過濾滅菌50mg/mlCb（羧芐青霉素）雙蒸水溶解，定容，過濾滅菌250mg/ml6-BA

4、(6-芐基嘌呤)1MNaOH或鹽酸溶解，雙蒸水定容，高壓滅菌1mg/mlNAA（萘乙酸）1MNaOH溶解，雙蒸水定容，高壓滅菌1mg/mlIAA95%乙醇溶解，雙蒸水定容，過濾滅菌1mg/ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone,AS)稱取196.2mgAS用10mlDMSO溶解，母液濃度100mM，-20℃避光保存，工作濃度100~200μM六、MS溶液的混合配制MS培養(yǎng)基時(shí)，每1L培養(yǎng)基?。耗敢?：大量A母液2：大量B母液3：Fe鹽母液4：微量母液5：有機(jī)肌醇蔗糖6-BANAAMS0無菌苗(1/2MSAmp)10ml5ml5ml0.5

5、ml5ml0.0515g——MS1共培養(yǎng)(AS6-BA,NAA)20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g500μL100μLMS2分化(KmCb6-BA,NAA)20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g500μL100μLMS3生根(KmCbIAA)10ml5ml5ml0.5ml5ml0.05g15g——5種母液分別依次加入到800ml蒸餾水中，混勻后加入肌醇、蔗糖和能高壓滅菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000ml，用1MNaOH調(diào)pH至5.8。最后加Phytagel（Sigma）4.4g或Agar10g。滅菌完后，在培

6、養(yǎng)基凝固前加入AS或抗生素及不能高壓滅菌的激素（IAA）。