MS固體培養(yǎng)基的配制

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1、MS固體培養(yǎng)基的配制一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)，掌握MS固體培養(yǎng)基的配制技術(shù)及操作技能。二、材料與用具配制MS培養(yǎng)基的各種母液、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、移液管、量筒、電飯煲、全自動高壓滅菌器、pH試紙、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、培養(yǎng)瓶、標(biāo)簽、鉛筆等。三、方法與步驟（一）按母液順序和規(guī)定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量（150-200ml）純凈水的量筒中。母液一30ml/L母液二15ml/L母液三15ml/L母液四15ml/L母液五30ml/L母液六7.5ml/L1-8組4人配1L，9-10組3人配1L。（二）加入植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)加入的具體調(diào)節(jié)

2、物質(zhì)與量視培養(yǎng)物不同而異（本次實(shí)驗(yàn)不加生長調(diào)節(jié)劑）。（三）定容加純凈水定容至1000ml。（四）倒入預(yù)先用鉛筆標(biāo)好刻度的電飯煲中。（五）加糖、加熱：加入蔗糖20g/L并開始加熱。（六）加瓊脂粉12g/L：在電飯煲中給培養(yǎng)基加溫至冒熱氣時(shí)均勻緩慢地加入瓊脂粉，用玻璃棒不斷攪拌至全部熔解并煮沸。（七）調(diào)節(jié)pH值：煮沸后，用試紙測試pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培養(yǎng)基的pH調(diào)整到5.6—5.8；加水至預(yù)先標(biāo)注的刻度處，煮沸1-2分鐘。（八）培養(yǎng)基分注把配置好的培養(yǎng)基用燒杯分注到培養(yǎng)瓶中，分注前用量筒量取30ml水倒入培養(yǎng)瓶測試，每瓶裝30ml（3瓶/100

3、ml）左右。分注后立即加蓋，貼上標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基的名稱、配制時(shí)間、配制人姓名。（九）培養(yǎng)基滅菌，無菌水、無菌瓶、無菌紙片制作。1.將蒸餾水注入滅菌腔，直至水流進(jìn)入水位板中間的水位指示器。2.將待滅菌的物品放入提籃中，將提籃放入滅菌腔中。3.插上電源，打開開關(guān)。4.旋緊“排汽旋鈕”，關(guān)閉滅菌腔蓋，直至指示燈“LOCKED”亮起。5.選擇滅菌程序，按“SET/ENT”鍵設(shè)置溫度為121℃，保溫時(shí)間20min。6.長按“START”鍵開始滅菌。7.滅菌結(jié)束時(shí)，所有程序執(zhí)行完畢且溫度低于80℃時(shí)，指示燈“COMP”閃爍，系統(tǒng)發(fā)出5聲長聲。8.先旋松“排汽旋鈕”，打開滅菌腔蓋，待蒸汽散開戴上隔

4、熱手套，取出滅菌物品。9.關(guān)閉電源，放出腔體內(nèi)的水，擦干腔體。