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1、大腸桿菌表達的重組人BMP論文王濤，陳蘇民，陳南春，趙偉欽，張曉楠【關(guān)鍵詞】重組人骨形成蛋白4成熟肽；重組人骨形成蛋白2成熟肽；發(fā)酵；蛋白質(zhì)類/分離和提純parisonoflargescalepreparationofrebinanthumanBMP4andBMP2maturepeptideexpressedinE.coli【Abstract】AIM:Topreparepurehumanbonemorphogeicproteinmaturepeptide(rhBMP4mandrhBMP2m)inlargescale.METHODS:TherhBMP4mandrhBMP2mengineering
2、strainsentedandinducedforexpressionin15LNBSfermenterrespectivelyandthebacterialcellses.Afterobtainingdatafrompreexperiments,allinclusionbodiesol/LureabufferandloadedonSPSepharoseFFcolumn.RESULTS:Attheendoffermentation,A600nmvaluesofthetoccupied40%ofthetotalbacterialproteinsandrhBMP2maccountedfor82.9
3、%and84.5%ofthetotalproteinsoftheinclusionbodiesrespectively.AfterloadedonSPSepharoseFFcolumn,rhBMP4mandrhBMP2mol/LNaClfractionsandthepurityreached96%and95%entationliquidandtherecoveryrateefermentationprogramandthesimilartechniquestopreparepurerhBMP4mandrhBMP2minlargescale.【Keyanbonemorphogeicprotein
4、4maturepeptide(rhBMP4m);rebinanthumanbonemorphogeicprotein2maturepeptide(rhBMP2m);fermentation;proteins/isolationβpurification【摘要】目的：大規(guī)模制備人骨形成蛋白成熟肽（hBMPm）：hBMP4m和hBMP2m.方法：兩種工程菌株分別含有能夠高表達hBMP4m和hBMP2m的質(zhì)粒，分別導(dǎo)入15LNBS發(fā)酵罐中進行恒溶氧高密度發(fā)酵和誘導(dǎo)表達，離心收集菌體,懸浮所收集的菌體，裂菌.freelol/L尿素緩沖液溶解，上SepharoseSPFF陽離子柱.結(jié)果：發(fā)酵菌液A600
5、nm值分別為28.8和26.3.SOSPAGE電泳后吸光度掃描表明hBMP4m占細菌總蛋白量的40.0%,hBMP2m占細菌總蛋白量的47.2%.洗滌4次后的包涵體中hBMP4m占蛋白量的82.9%,hBMP2m占蛋白量的84.5%.上SepharoseSPFF陽離子柱后，分別收集0.35mol/LNaCl和0.20mol/LNaCl洗脫部分，獲得純度為96%的hBMP4m及純度為95%的hBMP2m.其收獲量分別為1.30g/L發(fā)酵液和1.25g/L發(fā)酵液；收得率分別為34.33％和34.81％.結(jié)論：大規(guī)模制備hBMP4m和hBMP2m時，使用相同的發(fā)酵程序及相近的純化方法，都能夠得到較好
6、的收得率、較高的收獲量和純度.【關(guān)鍵詞】重組人骨形成蛋白4成熟肽；重組人骨形成蛋白2成熟肽；發(fā)酵；蛋白質(zhì)類/分離和提純0引言骨形成蛋白（bonemorphogeicprotein,BMP）屬于轉(zhuǎn)化生長因子TGFβ超家族，是一類多功能的分化因子，構(gòu)成一個結(jié)構(gòu)和功能相似的家族，由于可以誘導(dǎo)異位成骨而被命名，是骨骼系統(tǒng)正常發(fā)育所必不可少的［1］.而近年來的研究表明，BMPs在胚胎發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及造血系統(tǒng)等方面也具有重要作用和廣泛的臨床應(yīng)用前景［2-3］.我們在大腸桿菌系統(tǒng)表達制備出有良好誘導(dǎo)成骨活性的人rhBMP2成熟肽（rhBMP2maturepeptide,rhBMP2m）［4-5］和用大腸
7、桿菌系統(tǒng)表達制備有良好生物學(xué)活性的rhBMP4m［6］（國家專利申請?zhí)枺?00410073165.8）的基礎(chǔ)上，使用已經(jīng)構(gòu)建好的高表達rhBMP4m和rhBMP2m的大腸桿菌工程菌株［4-6］，用已比較成熟的制備rhBMP2m的流程，來比較兩者大規(guī)模發(fā)酵、純化的效果，旨在為rhBMP4m的大規(guī)模生產(chǎn)奠定基礎(chǔ).1材料和方法1.1材料工程菌株DH5α/pDH2BMP4m和DH5α/pDH2BMP2m由
