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《重組人hexastatin蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及蛋白純化》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：學(xué)號：l0023s2007415重組人Hexastatin蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及蛋白純化ExDressionandDurificationofsolublerecombinantEXDreSSlonancIDUrlllCatlon0IS0lUDlereC0mDlnanIHexastatininE．coli所院：姓名：指導(dǎo)老師：導(dǎo)師小組：學(xué)科專業(yè)：研究方向：完成日期：放射醫(yī)學(xué)研究所溫鐳趙啟仁張春明張春明宋娜玲趙啟仁生物化學(xué)與分子生物學(xué)分子生物學(xué)2010年05月中田醫(yī)學(xué)科學(xué)院&北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩}j研究生‘
2、}業(yè)淪義目錄技術(shù)路線??????????????????????????????“l(fā)摘要???????????????????????????????”3Abstr．a(chǎn)ct?????????????????????????????????????????“4前言??????????????????????????????????????????”5刖舌??????????????????????????????????????????”)材料與方法?????????????????????????????．．7l實驗材料????????????????????????????7
3、1．1主要實驗儀器???????????????????????·71．2主要實驗試劑???????????????????????一71．3引物????????????????????????????????????·81．4菌株、細(xì)胞株及質(zhì)粒????????????????????·81．5主要溶液?????????????????????????102實驗方法???????????????????????????‘142．1人Hexastatin基因的克隆和克隆載體的構(gòu)建??????????·142．2表達(dá)載體pMAL-c4x．Hexastatin的構(gòu)建?????????
4、???232．3重組人Hexastatin蛋白的表達(dá)及純化?????????????28實驗結(jié)果??????????????????????????????34討論??????????????????????????????????????????43結(jié)論??????????????????????????????????????????47參考文獻(xiàn)??????????????????????????????一48附錄一：綜述一新型腫瘤血管生成抑制劑Hexastatin的研究進(jìn)展??????51附錄二：綜述二源于Ⅳ型膠原的腫瘤血管生成抑制劑??????????59附錄三：英文縮
5、略詞匯表???????????????????????70北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士研究生論文技術(shù)路線EC9706細(xì)胞總RNA的提取和鑒定RT-PCR擴(kuò)增目的基因重組載體轉(zhuǎn)化克隆宿主菌陽性克隆的篩陽性重組質(zhì)粒與陽性克隆的篩目的表達(dá)擴(kuò)大培養(yǎng)細(xì)菌、蛋白的純化和鑒定接連的體載上Vm上V物隧RC接定連定鑒和鑒的切的粒酶粒質(zhì)的質(zhì)定化組體組鑒優(yōu)◆一◆撇◆黼◆刪◆㈣◆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩上研究生論文技術(shù)路線流程示意圖密嘲眥曲l①提取總刪A可／M眺J—PcRhexajta±h七二====j18．HexastatinpMAL-“x-H娃as紐tlnJ@蛋白表達(dá)盲r’II@蛋自純化可／～一油北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士
6、研究生論文摘要血管發(fā)生是從已有的血管中形成新生的管道，它對于生物體內(nèi)很多正常的生理過程來說是至關(guān)重要的。1971年FolkmaIl提出了著名的“腫瘤饑餓療法”，即腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移離不開新生血管的形成，氧氣從血管中擴(kuò)散的最大限值是150岬，通過抑制腫瘤新生血管的形成，阻斷腫瘤細(xì)胞賴以生存的氧氣及營養(yǎng)供給，腫瘤細(xì)胞便會發(fā)生凋亡。此學(xué)說的提出為腫瘤的生物治療提供了新的策略，尋找內(nèi)源性的血管生成抑制因子成為近年來研究的熱點。Hexastatin來源于細(xì)胞外基質(zhì)，是IV型膠原蛋白a6鏈的非膠原區(qū)NCl，由229個氨基酸組成，分子量是25kD。近年來研究表明Hexastatin可以通過一種
7、RGD非依賴方式與整合素分子a。p3結(jié)合，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附和遷移，并且劑量依賴性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，對新生血管的生成起到顯著的抑制作用。另外，實體瘤實驗證實HexaStatin還能有力地抑制腫瘤細(xì)胞的生長，它在癌組織中含量的下調(diào)可以作為腫瘤浸潤的重要指標(biāo)，起到提前預(yù)警的作用。本研究從人食管癌EC9706細(xì)胞中克隆出Hexastatin基因，在大腸桿菌中進(jìn)行了可溶性表達(dá)，并利用麥芽糖結(jié)合蛋白(MaltoseBindingProtein，MBP)可專一性結(jié)合于直鏈淀粉(AmyIose)親和樹
