pparγ激活對糖基化終末產(chǎn)物引起的大鼠腎系膜細胞tgfβ及ctgf mrna表達的影響

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1、PPARγ激活對糖基化終末產(chǎn)物引起的大鼠腎系膜細胞TGFβ及CTGFmRNA表達的影響作者：劉輝于曉艷魏海峰石艷苗春生李才鄒穎剛【摘要】目的觀察過氧化物酶體增殖體激活受體γ(PPARγ)激活對糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)引起的大鼠腎系膜細胞TGFβ及CTGFmRNA表達的影響。方法體外培養(yǎng)正常大鼠腎系膜細胞，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RTPCR)檢測不同濃度AGEs(0～400μg/ml1)及不同濃度PPAPγ)激活劑(羅格列酮)和PPARγ阻斷劑(GethodsRatmesangialcellsodif

2、iedbovineserumalbuminornativebovineserumalbumin.NormalmesangialcellsentsRNAerasechainreaction(RTPCR).TheexpressionsofTGFβandCTGFmRNAinmesangialcellinducedbyrosiglitazone(0～10μmol/L)andtheinhibitorofPPARγ(10μmol/L)RNAexpressinginducedbyAGEs(0～400mg/L)inmesang

3、ialcells.ConclusionsPPARγactivationcanrelievetheexpressionsofTGFβandCTGFmRNAinratmesangialcellsinducedbyAGEs，suggestingthatPPARγactivationhasakidneyprotectionindiabeticmellitusthroughamelioratingextracellularmatrixaccumulation.　　【Keyeproliferatoractivatedrec

4、eptorγ;Diabeticnephropathies;Glycosylationendproducts,Advanced;TGFβ;CTGF　糖尿病腎病(DN)的發(fā)病機制是以高血糖為啟動因素所誘導的各種血管活性物質(zhì)、生長因子、細胞介質(zhì)等綜合作用的結(jié)果，其中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)和結(jié)締組織生長因子(CTGF)的作用尤其受到關注。持續(xù)高血糖狀態(tài)下體內(nèi)蛋白質(zhì)能發(fā)生一系列非酶促糖基化反應，最后形成的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)在DN發(fā)生機制中具有重要意義〔1〕，AGEs可誘導TGFβ和CTGF等基因表達異常。過

5、氧化物酶體增殖體激活受體γ(PPARγ)是核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一，在脂肪生成、胰島素敏感性、細胞周期調(diào)節(jié)及細胞分化中起重要作用，抗糖尿病藥物胰島素增敏劑四氫噻唑烷二酮類藥物(TZDs)如羅格列酮(Rosiglitazone，RSG)是PPARγ的特異性激活劑。RSG不僅能減輕糖尿病腎小球細胞外基質(zhì)合成，還能增加細胞外基質(zhì)的降解〔2，3〕。然而PPARγ是否影響AGEs引起的細胞TGFβ和CTGF基因表達異常目前尚不清楚。本實驗通過體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞，研究AGEs對腎小球系膜細胞TGFβ和CTG

6、F表達的影響及PPARγ激活劑的調(diào)節(jié)作用，探討PPARγ激活劑對DN保護作用的具體機制?！　?材料與方法　　1.1主要試劑DMEM培養(yǎng)基(Gibco)，小牛血清(Hycolon)，HEPEs(Sigma)，牛血清白蛋白(BSA，組分Ⅴ，Sigma)、胰酶(Amresco)、DAB(Amresco)，Trizol，SupperⅡ逆轉(zhuǎn)錄酶(Gibco)，DNA聚合酶(TransGene)。DNAMarker(大連寶泰克公司)，RSG(天津史克必成公司)。PPARγ阻斷劑GEM。開始4d勿動培養(yǎng)瓶，第5天首次換液，約

7、2RNA含量的影響將細胞消化后，計數(shù)，以1×104個/孔接種至24孔板。待細胞80%融合時用含0.5%血清的培養(yǎng)基同步生長24h后，加入含AGEBSA及BSA的無血清培養(yǎng)基，濃度分別為0、25、50、100、200、400μg/ml。48h后用Trizol收集系膜細胞，80℃凍存提取RNA?！　?.4.2不同濃度RSG對AGEs引起的TGFβ、CTGFmRNA含量的影響將細胞消化后，計數(shù)，以1×104個/孔接種至24孔板。待細胞80%融合用0.5%血清的培養(yǎng)基同步24h后，每孔加入含100μg/mlAGEs和不

8、同濃度RSG的無血清培養(yǎng)基，RSG的濃度分別為0、1.25、2.5、5和10μmol/L。48h后用Trizol收集系膜細胞，80℃凍存提取RNA?！　?.4.3PPARγ阻斷劑(G：MarkerDL2000，7～12：BSA0～400μg/ml　　MarkerDL2000自上而下分別為：2000、1000、750、500、250、100b