鼻咽癌患者外周血t淋巴細(xì)胞亞群和nk細(xì)胞檢測(cè)論文

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1、鼻咽癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測(cè)論文【摘要】［目的］探討鼻咽癌患者T淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+）和自然殺傷（NK）細(xì)胞百分含量的變化及其意義。［方法］應(yīng)用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測(cè)109例鼻咽癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞的水平，其中未放療者38例，放療者71例，檢測(cè)時(shí)未發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者67例，已有復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者42例，并測(cè)定20例正常對(duì)照組作比較。［結(jié)果］鼻咽癌患者與正常對(duì)照組比較，外周血CD4+細(xì)胞水平（24.15±10.91）明顯下降（P0.01）；CD8+細(xì)胞水平（39.77±15.66)明顯上升（P0.01）；C

2、D4+/CD8+（0.75±0.54）嚴(yán)重倒置（P0.01）；CD3+細(xì)胞水平（61.55±15.96）無(wú)變化；NK細(xì)胞水平（18.20±13.04）升高（P0.05）；放療后除CD8+細(xì)胞水平上升（P0.05），其它指標(biāo)均無(wú)變化；復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移組除NK細(xì)胞水平上升（P0.05）.freelanCoulter公司EpicsMCL?鄄XL流式細(xì)胞儀，Coulter公司Q?鄄PREP溶血儀，BeckmanCoulter公司IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC雙色標(biāo)記單克隆抗體同型對(duì)照，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE雙色標(biāo)記單克隆抗體，CD4?鄄FITC/CD

3、8?鄄PE雙色標(biāo)記單克隆抗體。1.3實(shí)驗(yàn)方法取100μl外周抗凝血（EDTA抗凝），分別置于3個(gè)流式細(xì)胞反應(yīng)管中，加入20μl雙色標(biāo)記單克隆抗體。其中加入20μlIgG?鄄PE/IgG?鄄FITC的反應(yīng)管作為同型對(duì)照，加入CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE的反應(yīng)管檢測(cè)CD4+/CD8+，加入CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE的反應(yīng)管檢測(cè)CD3/CD16+CD56+?；靹蚝?，避光孵育15～20min。用Q?鄄PREP溶血儀溶血，溶血完成后，3000r/min離心5min，棄上清，加入500μlPBS混勻沉淀的白細(xì)胞，上機(jī)檢測(cè)。以FS和SS設(shè)門(mén)，取淋巴細(xì)胞

4、進(jìn)行檢測(cè)。先用IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC調(diào)節(jié)熒光，然后分別讀出CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE檢測(cè)值。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果2．1鼻咽癌組與正常對(duì)照組比較與正常對(duì)照組比較，鼻咽癌患者外周血CD4+細(xì)胞水平（24.15±10.91）顯著下降（P0.01）；CD8+細(xì)胞水平（39.77±15.66）顯著上升（P0.01）；CD4+/CD8+（0.75±0.54）嚴(yán)重倒置（P0.01）；CD3+細(xì)胞水平（61.55±15.96）無(wú)變化；NK細(xì)胞水平（18.20±13.04）升高（P0.

5、05），見(jiàn)表1。2.2未放療組與放療組比較放療組較未放療組CD8+細(xì)胞水平出現(xiàn)上升（P0.05）；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK水平在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見(jiàn)表2。2.3未發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組與發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組比較未發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移組較出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移組NK細(xì)胞水平出現(xiàn)上升（P0.05）；CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表3。3討論本研究結(jié)果表明，鼻咽癌患者有免疫狀態(tài)異常。鼻咽癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群存在顯著特點(diǎn)：CD4+/CD8+嚴(yán)重倒置，CD4+細(xì)胞水平下降，CD8+細(xì)胞水平升高。這種異常免疫狀態(tài)跟鼻咽

6、癌患者存在細(xì)胞免疫異常反應(yīng)有關(guān)，可能關(guān)系EB病毒感染后的免疫反應(yīng)。一般地，CD3+細(xì)胞代表成熟T淋巴細(xì)胞，是細(xì)胞免疫中主要的活性細(xì)胞。它按CD表型分為CD4+和CD8+兩大亞群。CD4+細(xì)胞又稱(chēng)輔助T細(xì)胞，能協(xié)助B細(xì)胞分泌抗體和調(diào)節(jié)其它T細(xì)胞群的免疫應(yīng)答。CD8+細(xì)胞常表現(xiàn)細(xì)胞毒活性，是主要的細(xì)胞毒效應(yīng)細(xì)胞。在T淋巴細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中，CD4+和CD8+細(xì)胞處于調(diào)節(jié)樞紐地位，其數(shù)量和比值變化反映免疫功能狀態(tài)3，4。NK細(xì)胞表型為CD16+或CD56+，是非特異性細(xì)胞毒細(xì)胞，可以殺傷丟失MHCⅠ類(lèi)分子的腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞，彌補(bǔ)CD8+細(xì)胞的不足3。在本研究中，與正常對(duì)照

7、組比較鼻咽癌患者外周血總T淋巴細(xì)胞即CD3+細(xì)胞無(wú)變化，CD4+細(xì)胞下降（P0.01），CD8+細(xì)胞上升（P0.01），CD4+/CD8+嚴(yán)重倒置（P0.01），NK細(xì)胞上升（P0.05）。細(xì)胞毒細(xì)胞（CD8+和NK）呈過(guò)度增殖，而輔助調(diào)節(jié)細(xì)胞（CD4+）呈抑制狀態(tài)，造成CD4+/CD8+嚴(yán)重倒置，證實(shí)鼻咽癌患者存在免疫狀態(tài)異常。未放療組與放療組比較，除CD8+細(xì)胞水平上升（P0.05），其它指標(biāo)均無(wú)變化。檢測(cè)時(shí)未發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組與已有復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組比較，除NK細(xì)胞水平上升（P0.05），其它指標(biāo)均無(wú)變化。值得注意的是CD4+/CD8+嚴(yán)重倒置（P0.01）

8、的狀態(tài)始終