酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)在小兒結(jié)核性腦膜炎診斷論文

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1、酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)在小兒結(jié)核性腦膜炎診斷論文討酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(ELISPOT)在小兒結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用價值。方法：收集0～14歲疑似結(jié)核性腦膜炎患兒共17例進行ELISPOT檢測，對最終確診病例進行分析，并與頭顱CT/MRI檢查、結(jié)核菌純蛋白衍生物試驗（PPD）試驗、腦脊液檢查、結(jié)核抗體檢查、胸片結(jié)果相對比。結(jié)果：在最終確診的13例結(jié)核性腦膜炎中，頭顱CT/MRI、PPD、腦脊液、結(jié)核抗體、胸片在入院5d內(nèi)的檢查陽性率分別為30.8％、30.8％、23.1％、12.5％、30.8％,而ELISPOT陽性率為76.9％，顯著高于其它輔助檢查方法（P＜0.

2、05)。結(jié)論：ELISPOT檢查靈敏、快速，對于小兒結(jié)核性腦膜炎有早期診斷價值。酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(enzyme-linkedimmunospotassay,ELISPOT)是一種從單細(xì)胞水平檢測分泌抗體或細(xì)胞因子細(xì)胞的免疫學(xué)新技術(shù)［1,2］。近年來基于兩種結(jié)核菌特異性抗原早期分泌抗原靶6(earlysecretoryantigentarget-6,ESAT-6)、培養(yǎng)濾液蛋白10(culturefiltrateprotein-10,CFP-10)的ELISPOT技術(shù)以其敏感、特異、簡便的優(yōu)點被用于結(jié)核病的診斷，取得了較好的成效［2～5］，在歐美已被批準(zhǔn)用于臨

3、床.freell,分離出外周血單個核細(xì)胞，利用ELISPOT試劑盒（OxfordImmunotecLtd.）進行檢測,每人份4孔，分別為測試孔A、測試孔B和陽性對照、陰性對照，所有試驗操作步驟嚴(yán)格依據(jù)試劑盒內(nèi)所附使用指導(dǎo)進行，最后用ChampSpotⅡTm型ELISPOT酶聯(lián)斑點圖像分析儀（北京賽智創(chuàng)業(yè)科技有限公司）進行計數(shù)分析。根據(jù)臨床需要在15～40d進行頭顱CT/MRI復(fù)查。1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)陰性對照孔有0～5個斑點時，測試孔A或B斑點數(shù)－陰性對照孔斑點數(shù)≥6；或當(dāng)陰性對照孔斑點數(shù)≥6時，測試孔A或B斑點數(shù)≥2倍陰性對照孔斑點數(shù)時結(jié)果判定為陽性；若陽性對

4、照孔反應(yīng)良好，但測試孔斑點數(shù)未達上述標(biāo)準(zhǔn)，則為陰性。1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,ELSPOT與其他診斷方法陽性率比較采用χ檢驗,檢驗水準(zhǔn)α＝0.05。2結(jié)果2.1一般情況17例中臨床確診結(jié)腦13例（76.5％），其余4例（23.5％）分別為病毒性腦炎2例，中毒性腦病1例，化膿性腦膜炎1例。13例結(jié)腦病例中有卡介苗接種后疤痕者5例（38.5％），有明確結(jié)核病接觸史者4例（30.8％），結(jié)腦臨床分期早期2例（15.4％），中期10例（76.9％），晚期1例（7.69%，死亡），合并粟粒性肺結(jié)核2例（15.4％）。2.2ELSPO

5、T試驗結(jié)果在確診結(jié)腦的13例中，經(jīng)ELSPOT檢測陽性10例（76.9％），陰性3例（23.1％）。非結(jié)腦病例中ELSPOT檢測無1例陽性。典型ELSPOT結(jié)果見圖1。注：每孔左上角數(shù)字為ELISPOT酶聯(lián)斑點圖像分析儀自動計數(shù)結(jié)果圖1典型ELSPOT結(jié)果（略）2.3ELISPOT與其它各種方法檢查陽性率的比較確診結(jié)腦13例中，入院5d內(nèi)ELISPOT陽性率為76.9％，頭顱CT/MRI、PPD、腦脊液、結(jié)核抗體、胸片檢查的陽性率分別為30.8％、JP230.8％、23.1％、12.5％、30.8％,ELISPOT陽性率顯著高于其它輔助檢查（P＜0.05)

6、。經(jīng)過復(fù)查，入院40d頭顱CT/MRI陽性率達到61.5%,與ELISPOT早期陽性率對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05)(表1)。表1ELSPOT與其它各種方法檢查陽性率的比較（略）注：(1）PPD試驗結(jié)果以72h硬結(jié)直徑≥5mm為陽性；(2）以同時進行了ELISPOT和結(jié)核抗體檢測的人數(shù)進行配對χ檢驗3討論結(jié)腦是最嚴(yán)重的肺外結(jié)核病，約占兒童結(jié)核病死亡的75%，延誤診斷是死亡的主要原因［7］，早期診斷、合理治療可以明顯改善其預(yù)后。目前對小兒結(jié)腦診斷主要依靠病史、結(jié)核病接觸史、PPD、顱腦影像學(xué)檢查、腦脊液檢查等綜合判斷。由于疾病發(fā)展階段及自身免疫力的不同,

7、小兒結(jié)腦臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,.freelm，其中3例硬結(jié)直徑小于10mm，在廣泛接種卡介苗的新疆地區(qū)因無法排除卡介苗的影響，診斷價值有限，而ELISPOT由于不受既往卡介苗接種的影響，其陽性結(jié)果更支持結(jié)腦的診斷。腦脊液檢查是結(jié)腦診斷的重要手段之一，然而結(jié)腦早期腦脊液變化特異性并不高，對于腦脊液變化不典型的病例早期很難與其他類型腦炎、腦膜炎相鑒別。方芳等［12］總結(jié)了103例小兒結(jié)腦后發(fā)現(xiàn)，初次腦脊液檢查有典型改變者僅49.4％，本組病例中初次腦脊液檢查有診斷意義者陽性率更低，僅占23.1％，均為結(jié)腦中、晚期患兒，因而單次腦脊液檢查的診斷價值有限，不利于早期診斷

8、的確立。動態(tài)追蹤腦脊液變化有望提高診斷的陽性率。而E