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1、大孔吸附樹(shù)脂法分離純化山茱萸總皂苷論文吳紅,梁恒,吳道澄，袁忠?！娟P(guān)鍵詞】大孔吸附樹(shù)脂【Abstract】AIM：TooptimizetheextractionandrefinementoftotalsaponinsfromCornusofficinalisbycolumnchromatographyofmacroreticularresin.METHODS：TotalsaponinsLL-1ofethanolandpurifiedacroreticularresinandelutedLL-1,500mLL-1and700mLL-1ofethanol.Adsorptio
2、ncapabilityandelutionparametersCornusofficinalisenrichedin500mLL-1ofethanolelutingsolution.Thedosageofelutionreagentsesasthesamplevolumeandtheelutiveratioethodsethodtousemacroreticularresintoadsorbandpurifytotalsaponinsincornusofficinalis.【Keyacroreticularresin【摘要】目的：研究并優(yōu)化大孔樹(shù)脂法分離純化山茱萸總皂苷
3、.方法：700mLL-１乙醇提取后，上HPD300型大孔吸附樹(shù)脂，水洗后分別用300mLL-1，500mLL-1，700mLL-1乙醇洗脫，考察大孔樹(shù)脂富集、純化山茱萸總皂苷的吸附性能和洗脫參數(shù)，并與常規(guī)溶劑提取法相對(duì)照.結(jié)果：山茱萸總皂苷富集于500mLL-1乙醇洗脫液部分.freelLL-1乙醇回流提取3次［７］，過(guò)濾，減壓濃縮至無(wú)乙醇味，加蒸餾水適量，冰箱內(nèi)靜置過(guò)夜，離心得山茱萸樣品液(含生藥１kgL-1).吸取山茱萸樣品液一定量，水浴下?lián)]干，精密加入50gL-1香草醛冰醋酸02mL，08mL高氯酸，振搖混勻后于65℃水浴加熱20min，冰水冷卻后，加冰醋酸5mL
4、搖勻，隨行試劑做空白，554nm處測(cè)定A值［8］.1.2.2大孔吸附樹(shù)脂預(yù)處理與再生大孔吸附樹(shù)脂一般含有未聚合的單體及殘留溶劑，使用前須先行除去.樹(shù)脂用乙醇浸泡2d，傾去上浮物后濕法裝柱，用乙醇洗至流出液與水混合不呈現(xiàn)白色乳濁現(xiàn)象即可，然后以大量蒸餾水洗凈柱中乙醇，水浸泡備用；再生時(shí)用900mLL-1乙醇洗脫至流出液無(wú)色，以大量水洗去醇即可.如果樹(shù)脂顏色較深，可用一定濃度的酸或堿除去吸附性雜質(zhì)，最后水洗至流出液呈中性.1.2.3洗脫劑濃度的選擇精密吸取山茱萸總苷提取液5mL上柱，依次用100mL蒸餾水，300mLL-1乙醇、500mLL-1乙醇、700mLL-1乙醇各6
5、0mL洗脫，水洗脫液每25mL收集1份，乙醇洗脫液每15mL收集1份，比色法測(cè)定總皂苷含量，以容量瓶編號(hào)和總皂苷含量為坐標(biāo)繪制洗脫曲線.另吸取人參皂苷Re、蔗糖和谷甾醇的混合溶液2mL，加入大孔樹(shù)脂柱，依次用水、500mLL-1，700mLL-1，900mLL-1乙醇洗脫，每2mL分段收集，薄層層析檢測(cè)收集液性質(zhì)：洗脫液濃縮后點(diǎn)樣，正丁醇冰醋酸水(4∶1∶5)上層徑向展開(kāi)，噴苯胺鄰苯二甲酸，110℃烘5min，檢測(cè)糖的特征性斑點(diǎn)；氯仿甲醇水(65∶35∶10)下層展開(kāi)，噴100gL-1硫酸乙醇，105℃檢測(cè)皂苷的紫色斑點(diǎn)；另噴200gL-1三氯化銻氯仿溶液，60~70℃
6、顯色，檢測(cè)谷甾醇（脂溶性雜質(zhì)）.1.2.4大孔樹(shù)脂吸附容量的測(cè)定精密吸取2，4，6，8，10mL的山茱萸總皂苷樣品液，分次通過(guò)預(yù)先處理好的(30±02)g大孔吸附樹(shù)脂柱，每次用20mL水洗，流出液蒸干，Liebermann反應(yīng)檢測(cè)皂苷并測(cè)定總皂苷的含量，計(jì)算吸附容量.結(jié)果見(jiàn)Tab1.表1HPD300型大孔樹(shù)脂吸附容量測(cè)定結(jié)果（略）Tab1ResultsofadsorptioncapabilityL分別上柱，蒸餾水洗至流出液無(wú)色后，500mLL-1乙醇100mL洗脫，分段收集，測(cè)定總皂苷含量.1.2.6兩種提取工藝山茱萸總皂苷含量的比較①大孔樹(shù)脂法分離提取總皂苷：60℃下
7、干燥至恒重的山茱萸500g，6倍量、3倍量、2倍量700mLL-1乙醇提取3次，合并濾液，減壓回收乙醇至一定量，加入適量水，繼續(xù)回收至無(wú)醇味，加水使每2mL藥液相當(dāng)于1g原藥.藥液通過(guò)預(yù)處理的HPD300大孔吸附樹(shù)脂柱，水洗至流出液無(wú)色后，改用500mLL-1乙醇洗脫，TLC檢測(cè)洗脫終點(diǎn).濾液通過(guò)鋪有少量中性氧化鋁的漏斗，減壓回收乙醇，水浴上蒸至粘稠狀，真空干燥即得山茱萸總皂苷，總皂苷濃度以人參皂苷Re計(jì).②溶劑法：另取干燥至恒重的山茱萸500g，700mLL-1乙醇提取3次，合并濾液，減壓濃縮后，加入適量水，乙醚、正丁醇分次萃取，正丁醇
