gdnf在慢性收縮性損傷大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)中的蛋白表達(dá)

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1、GDNF在慢性收縮性損傷大鼠脊髓背根神經(jīng)節(jié)中的蛋白表達(dá)作者：夏小萍，馬正良，朱巍，周錦勇【摘要】目的探討膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)在慢性收縮性損傷(CCI)所致神經(jīng)病理性疼痛大鼠的L4背根神經(jīng)節(jié)中的蛋白表達(dá)。方法實(shí)驗(yàn)1：24只SD大鼠，隨機(jī)分為正常組(Naive組)、假手術(shù)組(Sham組)和CCI組(每組n=8)。Naive組不做任何手術(shù);Sham組僅暴露坐骨神經(jīng);CCI組按Bent法結(jié)扎右側(cè)坐骨神經(jīng)主干制備CCI模型。分別測(cè)定Sham組和CCI組術(shù)前2天(基礎(chǔ)值)及術(shù)后第1、3、5、7、14、21天(Naive組則在相對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn))大

2、鼠同側(cè)(本實(shí)驗(yàn)為右側(cè))后足機(jī)械縮足反射閾值(Mechanicalentandpaeasured2daysbeforesurgery(baseline)and1,3,5,7,14and21daysafteroperation(easuredatthecorrespondingtimepoints).Experiment2:18Sprague-DaandCCIgroups(n=6each).Theanimalmodeloved;intheNaivegrouptheratsunderoved,andintheShamgrouptherightsciat

3、icnerveinedby組)和CCI組(每組n=6)。Naive組不做任何手術(shù)，直接取右側(cè)L4背根神經(jīng)節(jié);Sham組僅暴露坐骨神經(jīng)，術(shù)后第7天處死大鼠取同側(cè)L4背根神經(jīng)節(jié);CCI組制備CCI模型于術(shù)后第7天處死大鼠取同側(cè)L4背根神經(jīng)節(jié)，采用in，取上清液，4℃105g離心1h。離心沉淀加入勻漿液，沉淀充分溶解后在4℃105g離心1h，上清即為胞膜蛋白?！　?.3.2電泳、條帶分析按Bradford法測(cè)定樣本蛋白濃度后，加入1/4體積的5倍樣本緩沖液，95℃水浴變性5min。取等量40μg蛋白樣本加至12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠上恒壓電泳，濕轉(zhuǎn)法

4、轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。分別加入5%脫脂奶粉TBST配制的一抗(1∶200兔抗鼠GDNF,SantaCruz公司)，在搖床平臺(tái)上于室溫孵育4h，TBST漂洗濾膜3次，每次10min。再加入小牛抗兔二抗(1∶500,SantaCruz公司)，于37℃平緩搖動(dòng)溫育1h。采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(ECL)檢測(cè)信號(hào)。濾膜浸入含化學(xué)發(fā)光試劑A、B的水溶液中激發(fā)熒光，拍攝并掃描照片。反應(yīng)條帶作半定量分析?！　?.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)均以±s表示，所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0軟件處理，組內(nèi)比較用t檢驗(yàn)，組間比較用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05認(rèn)為差異有顯著性

5、。　　2結(jié)果　　2.1各組大鼠M]//趙志奇.疼痛及其脊髓機(jī)理.上海：上?？萍冀逃霭嫔纾?000:83-144.　　[4]BridgesD,ThompsonSechanismsofneuropathicpain[J].BrJAnaesth,2001,87(1):12-26.　　[5]FukuokaT,KobayashiK,YamanakaH,etal.parativestudyofthedistributionoftheα-subunitsofvoltage-gatedsodiumchannelsinnormalandaxotomizedrat

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7、dreleaseofsomatostatininthedorsalhornofthespinalcord[J].JNeurochem,2001,78(2):221-229.