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1、脂多糖體外刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的影響作者：宋美芳，金沈銳，曾南，沈映君【摘要】目的探討時(shí)間和劑量對脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的影響。方法常規(guī)提取和培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。時(shí)效實(shí)驗(yàn)，加入終濃度為1μg/mlLPS，分別刺激1，3，6，12h后取材;量效實(shí)驗(yàn)，分別加入終濃度為0.00，0.01，0.1，1，10μg/mlLPS，3h后取材。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA的表達(dá)采用RT-PCR進(jìn)行。結(jié)果①在LPS1μg/ml劑量下6h內(nèi)，隨著時(shí)間的延長，TLR2/4mRNA的表
2、達(dá)量逐漸上升，與空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05，P<0.01);但刺激時(shí)間達(dá)12h時(shí)，細(xì)胞開始脫壁、死亡。②在LPS0.01～1μg/ml劑量范圍內(nèi)，隨著LPS濃度的增加，TLR2/4mRNA的表達(dá)量逐漸上升，呈一定劑量依賴關(guān)系，與空白對照組相比有顯著性差異，(P<0.05或P<0.01);但當(dāng)LPS濃度達(dá)10μg/ml，TLR2/4mRNA的表達(dá)量反而下降。結(jié)論用LPS體外刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，在0.01～1μg/ml濃度范圍內(nèi)，在1～6h時(shí)間內(nèi)，其TLR2/4mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)出一定的時(shí)效與量效
3、關(guān)系，該研究可為今后的研究者提供有益的時(shí)間和劑量參考。【關(guān)鍵詞】脂多糖;腹腔巨噬細(xì)胞;Toll樣受體2/4;基因表達(dá) Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofLPSontheexpressionofmRNAofTLR2/4ofmouseperitonealmacrophageinvitro.MethodsMouseperitonealmacrophagel)ulateperitonealmacrophageinvitro，thentheexpressionTLR2/4ofmRNAetime，LPS(
4、0.001，0.01，0.1，1，10μg/ml)ulateperitonealmacrophageinvitro，andtheexpressionsRNAinperitonealmacrophagel(P<0.01orP<0.05)，buttheexpressionl，theexpressionofTLR2/4mRNAinperitonealmacrophagel.ConclusionExpressionofTLR2/4mRNAinmouseperitonealmacrophageeanddosageinvitro.T
5、imeisfrom1to6h,anddosageisfrom0.01μg/mlto1μg/ml. Keyacrophage;Toll-likereceptors2/4;Geneexpression 脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)其產(chǎn)生與釋放許多活性物質(zhì)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生[1，2]。Toll樣受體(Toll-likereceptor，TLR)[3]是近幾年發(fā)現(xiàn)的一類天然免疫受體，有10種TLR家族成員，其中與LPS信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的主要是TLR2和TLR4。現(xiàn)有 3結(jié)果 3.1LPS
6、誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1，圖1所示。未受LPS刺激的腹腔巨噬細(xì)胞有少量的TLR2、TLR4mRNA表達(dá)。當(dāng)LPS刺激1h后，TLR4mRNA表達(dá)明顯高于對照組(P<0.05);刺激達(dá)3～6h，TLR2、TLR4mRNA的表達(dá)明顯高于對照組，并維持在一個(gè)高水平(P<0.01);但12h后，細(xì)胞開始脫壁、死亡，細(xì)胞總RNA未能成功提取。表1LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01;n=3 3.2LP
7、S對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)的劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，圖2～3。未受LPS刺激時(shí)僅有少量TLR2、TLR4mRNA表達(dá);隨濃度的增加，TLR2、TLR4mRNA表達(dá)顯著上升，在LPS濃度為0.01μg/ml時(shí)，與對照組相比顯著差異(P<0.05);在LPS濃度為1μg/ml時(shí)，兩者表達(dá)達(dá)到峰值，與對照組相比顯著差異(P<0.01);但當(dāng)LPS濃度上升為10μg/ml時(shí)，TLR2、TLR4mRNA表達(dá)則出現(xiàn)下降。1～4分別代表空白、LPS1h、LPS3h、表2LPS對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TLR2/4mRNA表達(dá)
8、 4討論 來源于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的LPS被用于炎癥的研究已有幾十年的歷史。從大量
