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《成骨肉瘤組織中stathmin基因的表達(dá)意義論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、成骨肉瘤組織中stathmin基因的表達(dá)意義論文曲建波張惠中馬保安范清宇張正旭【關(guān)鍵詞】成骨肉瘤,.freelin;原位雜交;成骨肉瘤摘要:目的明確stathmin基因在人成骨肉瘤組織有高表達(dá)并對(duì)其進(jìn)行組織學(xué)定位.方法用地高辛標(biāo)記全長(zhǎng)stath-min基因，原位雜交方法檢測(cè)stathmin基因在45例人成骨肉瘤組織及10例正常組織中的表達(dá)情況.結(jié)果在45例成骨肉瘤組織中有24例stathmin基因呈陽(yáng)性表達(dá)（陽(yáng)性率53%），陽(yáng)性顆?？梢娪诎|(zhì)及胞核;10例正常組織中2例呈弱陽(yáng)性表達(dá)，差異顯著（P0.05）.結(jié)論Stathmin基因在
2、骨肉瘤中的高表達(dá)與骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展有重要的相關(guān)性，該基因有望成為人成骨肉瘤生物治療中的重要靶基因.Keyin;insituhybridization;osteosaraAbstract:AIMToobserveoverexpressionofstathmingeneanditslocalizationinthetissueofosteosara.METHODSTheoverexpressionofthestathmingeneinedin45osteosaraspecimensbyinsituhybridiza-tioningen
3、eplifiedfromK562cellsbyRT-PCRmethod.RESULTSOverexpressionofstathmingeneandnuclear.Among10casesofnormaltissue，only2shoingenebetaltissue.CONCLUSIONOverexpreesionofstathmingenemayplayakeyroleinthepathogenisisanddevelopmentofosteosarco-ma.Itmaybeaveryimportantbiotherapytar
4、getinthetreat-mentofosteosara.0引言成骨肉瘤（osteosara）是常見的惡性程度極高的骨源性腫瘤，5a存活率不足20%［1］.Stathmin（又稱Op18.freelin基因高表達(dá).我們應(yīng)用地高辛標(biāo)記的全長(zhǎng)stathmin基因?yàn)樘结?，原位雜交（insituhy-bridization，ISH）方法檢測(cè)其在多種成骨肉瘤組織中表達(dá)情況.1材料和方法1.1材料本研究所手術(shù)取骨肉瘤組織標(biāo)本45（男33，女12）例，年齡8～43歲，另選正常組織標(biāo)本10例.標(biāo)本經(jīng)40gL-1甲醛固定，石蠟包埋，厚5μm連續(xù)切片
5、，病理確診，骨母細(xì)胞型18例，軟骨母細(xì)胞型13例，纖維母細(xì)胞型14例.1.2方法全長(zhǎng)stathmin基因的RT-PCR擴(kuò)增:Trizol法提取K562細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈（Gibico公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒及說(shuō)明），常規(guī)PCR擴(kuò)增stathmin基因，所用引物如下（合成于上海博亞生物技術(shù)公司）:上游引物:5’-CATATGGCTTCTTCTGATATCCAG-3’;下游引物:5’-CTCGAGTTAGTCAGCTTCAGTCTCGTC-3’.PCR反應(yīng)體系為:模板cDNA5μL，10×PCR緩沖液5μL，10mmolL-
6、1dNTP2μL，10nmolL-1-1引物5μL及TaqDNA聚合酶1μL，加水至50μL，于94℃30s，58℃30s，72℃40s，反應(yīng)35個(gè)循環(huán).采用15gL-1低溶點(diǎn)瓊脂糖凝膠電泳分離并回收PCR產(chǎn)物中480bp條帶（Fig1）.探針標(biāo)記:Digoxigenin標(biāo)記盒購(gòu)于德國(guó)BoehrigerMannheim公司，標(biāo)記過程按說(shuō)明書進(jìn)行.所用雜交試劑為博士德公司試劑盒，雜交步驟按說(shuō)明書進(jìn)行.切片常規(guī)脫蠟至水，加5mLL-1過氧化氫甲醇液封閉內(nèi)源性過氧化物酶，胃蛋白酶消化暴露核酸，每塊組織切片分別滴加20μL雜交液（10mgL
7、-1）雜交過夜，滴加封閉液，加鼠抗地高辛抗體，分別滴加生物素化的羊抗鼠二抗和ABC復(fù)合物后DAB顯色.常規(guī)脫水、透明、封片.對(duì)照實(shí)驗(yàn)分別用已知陽(yáng)性的K562細(xì)胞甩片同步染色作為陽(yáng)性對(duì)照;以PBS液替代抗地高辛抗體作為陰性對(duì)照.陽(yáng)性對(duì)照為陽(yáng)性，陰性對(duì)照為陰性.以細(xì)胞質(zhì)或胞核呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，每例切片均至少觀察5個(gè)具有代表性的高倍視野.圖1RT-PCR擴(kuò)增全長(zhǎng)stathmin基因電泳回收結(jié)果略統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:以SVSTA統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn).2結(jié)果在骨肉瘤45例標(biāo)本中24例stathmin基因呈過表達(dá)，陽(yáng)性率53%，10例正常組織中僅2例
8、呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，陽(yáng)性顆?？梢娪诎|(zhì)及胞核（Fig1，2）.Stath-min基因在人成骨肉瘤組織和正常組織中的表達(dá)存在顯著性差異（Tab1，P0.05）.Stathmin基因在不同病理類型成骨肉瘤中的陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著差異（P0.05，F(xiàn)
