反相高效液相色譜負(fù)峰測(cè)定法研究以及酮類(lèi)的測(cè)定

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1、反相高效液相色譜負(fù)峰測(cè)定法研究以及酮類(lèi)的測(cè)定作者：王培郭治安陳海旭王麗琴【摘要】　　研究了反相液相色譜中負(fù)峰現(xiàn)象及產(chǎn)生的原理，應(yīng)用計(jì)量置換作用原理解釋了樣品在色譜柱中的計(jì)量置換保留行為；應(yīng)用負(fù)峰法測(cè)試了甲基脂肪酮各組分的含量。本研究采用AgilentC18色譜柱(150mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為V（甲醇）∶V(水,含0.01mmol/L磺基水楊酸)=60∶40，紫外檢測(cè)器(λsig=310nm，λref=275nm)。本方法簡(jiǎn)便，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r均大于0.9993；甲基酮的定量下限為0.041μg；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.52%～0.80%。【關(guān)鍵詞】反相高效液相色譜；負(fù)峰法；計(jì)量置

2、換；甲基酮　　AbstractThephenomenonofnegativepeaksultravioletdetection(UV)atography,solutemoleculesinthemobilephaseundergomanysuccessiveadsorptionsanddesorptions.Itetricdisplacement.Thestoichiometricdisplacementretentionbehaviorofsamplesinthecolumnixedketonesthestudy,UVdetectorcanbeusedtodetectthesampl

3、eatographyseparationedonAgilentC18columnethanolmol/Lasmobilephaseand，λref=275nm).ThemethodpleandthecorrelationcoefficientsitofquantitativedetectionethylketonesandthEirrelativestandarddeviationsanceliquidchromatography;Negativepeak;Stoichiometricdisplacement;Methylketones　　　1引言反相液相色譜中負(fù)峰測(cè)定法是一種間接光

4、度檢測(cè)方法，廣泛應(yīng)用于離子色譜和毛細(xì)管電泳中，檢測(cè)對(duì)象基本是離子型化合物[1～5]，對(duì)于其作用機(jī)理也有相關(guān)解釋[3～5]。而由于缺乏合理的理論解釋?zhuān)g接光度反相液相色譜未得到很好的應(yīng)用。色譜計(jì)量置換機(jī)理[6]即一個(gè)溶質(zhì)分子被吸附劑吸附的同時(shí)，必伴隨著一定計(jì)量數(shù)目的溶劑分子離開(kāi)溶質(zhì)分子與吸附劑的界面而返回到溶液中。這個(gè)理論很好地解釋了間接光度反相液相色譜測(cè)定中出現(xiàn)的負(fù)峰現(xiàn)象。若應(yīng)用紫外檢測(cè)器，樣品分子是無(wú)紫外吸收或弱紫外吸收的分子，流動(dòng)相含有紫外吸收分子，則在色譜分離過(guò)程中樣品分子與固定相上吸附的紫外吸收分子發(fā)生置換使其返回到流動(dòng)相中，相應(yīng)譜帶的紫外吸收分子濃度降低，檢測(cè)器檢測(cè)出負(fù)峰（即

5、弱吸收峰）信號(hào)。因此，負(fù)峰法使紫外檢測(cè)器可應(yīng)用于無(wú)紫外吸收或弱紫外吸收的物質(zhì)的分析測(cè)定。醛酮分子在紫外區(qū)有很微弱的吸收，用紫外檢測(cè)器一般很難直接測(cè)定。通常，醛酮的測(cè)定需利用氨化還原反應(yīng)在其還原端接上有紫外吸收的基團(tuán)，例如2,4二硝基苯肼衍生測(cè)定法[7,8]。若能借鑒色譜中的計(jì)量置換機(jī)理，采用間接光度技術(shù)直接測(cè)定醛酮，則可消除衍生化操作帶來(lái)的麻煩和誤差?！　?.4本底試劑濃度的選擇將本底物質(zhì)加入流動(dòng)相中，會(huì)使得基線(xiàn)噪音增大，所以選擇本底試劑的濃度應(yīng)盡可能低；但如果其濃度太低，將降低檢測(cè)的靈敏度。本實(shí)驗(yàn)分別配制本底試劑濃度0.005，0.01，0.02和0.05mmol/L的流動(dòng)相，平衡

6、儀器至基線(xiàn)平直，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由圖3所示，基線(xiàn)噪音隨本底物質(zhì)濃度變化較大，且當(dāng)本底物質(zhì)濃度為0.01mmol/L時(shí)，噪音最小，最小檢測(cè)量最低。所以，確定流動(dòng)相中所加的磺基水楊酸的濃度為0.01mmol/L?！　?.5甲基酮系列分離準(zhǔn)確量取丙酮、丁酮、甲基異丙基甲酮和甲基異丁基甲酮各100μL于10mL容量瓶中，用本底試劑濃度為0.01mmol/L的流動(dòng)相作為溶劑加至刻度，搖勻。取10μL此甲基酮混合溶液進(jìn)樣進(jìn)行色譜分離（圖4），分離結(jié)果良好，以上各物質(zhì)的分離度均大于1.5，峰形良好?！　?.6線(xiàn)性關(guān)系、精密度和檢出限峰面積和進(jìn)樣量成正比，是色譜定量分析的依據(jù)。本方法是根據(jù)色譜過(guò)程樣品組分對(duì)

7、本底試劑的置換作用建立的，測(cè)定的是負(fù)峰，為考察負(fù)峰面積與進(jìn)樣量間的關(guān)系，在本文選定的色譜條件下，取上述甲基酮溶液分別進(jìn)樣2，4，6，8和10μL。將所測(cè)得的峰面積與對(duì)應(yīng)酮的絕對(duì)量進(jìn)行線(xiàn)性回歸，丙酮、丁酮、甲基異丙基甲酮、甲基異丁基甲酮的峰面積A與其絕對(duì)進(jìn)樣量x的工作曲線(xiàn)分別為：A=226.19x－123.62，A=230.24x－98.855，A=218.65x－110.01，A=179.63x－45.128，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r分別為0.9993，