石韋醇提物抑菌活性的初步研究論文

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1、石韋醇提物抑菌活性的初步研究論文李雁群，黎樺，陳超君，覃鋒，王愛(ài)勤，黃榮韶，林偉國(guó)【摘要】目的研究石韋地上部醇提物的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4個(gè)極性部位對(duì)大腸桿菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、藤黃八疊球菌、黃曲霉、青霉、黑曲霉等8種常見(jiàn)菌的抑制作用。方法采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，觀察并測(cè)量抑菌環(huán)的大小。結(jié)果石韋醇提物的醋酸乙酯、正丁醇和水相萃取物對(duì)供試細(xì)菌均有不同程度的抑制作用。其中正丁醇相萃取物和水相萃取物的抑菌效果較好。石油醚相萃取物對(duì)這8種供試菌均無(wú)明顯抑菌效果.freel的石壁

2、或樹(shù)干上。據(jù)研究，石韋的主要藥用成分是芒果苷（具抗菌、抗單純皰疹病毒）、異芒果苷（鎮(zhèn)咳祛痰、抗單純皰疹病毒作用）、綠原酸（抗菌、興奮中樞神經(jīng)等作用）［2～4］，但有關(guān)石韋化學(xué)成分的抑菌性研究卻很少，藥用狀況復(fù)雜，為深入開(kāi)發(fā)這一豐富自然資源，本文對(duì)石韋地上部醇提物石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水不同極性溶劑得到的各部位提取物進(jìn)行抑菌活性研究，以期探明石韋主要抑菌活性成分的極性部位和適宜的提取溶劑，并為石韋的合理開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。1儀器與材料1.1儀器與材料超凈工作臺(tái)、手提式滅菌鍋、恒溫控制箱、冰箱、游標(biāo)卡尺、鑷子、接

3、種針、三角瓶等；石油醚、醋酸乙酯、乙醇、正丁醇等試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)材料于200711采自廣西武鳴大明山國(guó)家級(jí)水源林保護(hù)區(qū)海拔1200m的沿路石壁上或亂石堆環(huán)境中，經(jīng)廣西大學(xué)植物分類學(xué)黎樺副教授鑒定為石韋P.lingua，將地上部洗凈，自然風(fēng)干后磨成粉末，過(guò)40目篩備用。1.2供試菌種供試細(xì)菌：大腸桿菌Escherichiacoli，普通變形桿菌Proteusvulgaris，金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus，枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis，藤黃八疊球菌Sarcinal

4、utea。供試真菌：黃曲霉Aspergillusflavas，青霉Penicilliumsp.，黑曲霉Aspergillusniger。以上菌種均由廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院植物保護(hù)系微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。1.3培養(yǎng)基細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，真菌用馬鈴薯培養(yǎng)基［5］培養(yǎng)。2方法2.1菌懸液或孢子懸液制備采用平板菌落計(jì)數(shù)法［5］。將受試菌在斜面培養(yǎng)基活化2～3代后，用接種環(huán)從斜面上刮菌苔兩環(huán)，分別收集到內(nèi)盛有100ml無(wú)菌水的250ml的三角瓶中，將受試菌配成終濃度0.1×107個(gè)/ml的菌懸液，備用。2.2樣液制備石韋

5、地上部醇提取物不同極性部位的制備：稱取粉碎好的石韋樣品4kg，用體積分?jǐn)?shù)90%乙醇將樣品浸泡3次（料液比1∶15），每次7d，提取液在40°C下減壓蒸餾，回收溶劑，得乙醇浸膏。將乙醇浸膏懸浮于蒸餾水，先后用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和蒸餾水萃取，分別得石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4部分萃取物，同前濃縮，即得各極性部位。2.3石韋抗菌作用的檢測(cè)方法采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)［6］。在超凈工作臺(tái)上將滅菌后的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿15ml，放置冷卻。用無(wú)菌移液管取0.1ml細(xì)菌液加于平皿中均勻涂布于平板

6、（內(nèi)徑90mm）表面后。取經(jīng)滅菌的標(biāo)準(zhǔn)濾紙（直徑6mm），分別蘸取石韋醇提物的不同極性部位并貼于平板表面，每個(gè)培養(yǎng)皿放3片濾紙，以蒸餾水、石油醚為對(duì)照液。細(xì)菌于37℃培養(yǎng)24h、真菌于28℃培養(yǎng)48h后，檢測(cè)抑菌環(huán)的有無(wú)并測(cè)量抑菌環(huán)直徑，每種提取液對(duì)8種供試菌重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果取平均值。出現(xiàn)抑菌環(huán)的菌株才作MIC檢測(cè)。2.4最小抑菌質(zhì)量濃度的檢測(cè)采用紙片擴(kuò)散法方法同“2.3”，將各溶液稀釋成100，50，25，12.5，6.25，3.125mg/ml的質(zhì)量濃度梯度，以未見(jiàn)抑菌環(huán)的最高質(zhì)量濃度為MIC。3結(jié)果

7、3.1不同極性部位的抑菌活性的比較對(duì)石韋地上部醇提物不同極性部位的抑菌活性進(jìn)行比較,這4種溶劑極性大小為：石油醚＜醋酸乙酯＜正丁醇＜水。從表1可以看出，石韋醇提物的不同極性部位對(duì)5種細(xì)菌的影響作用不同，并存在一定的差異，而且同一極性部分對(duì)不同種細(xì)菌的抑制效果也不同。對(duì)5種細(xì)菌抑菌效果以極性較強(qiáng)的提取物較為突出，正丁醇相和水相對(duì)藤黃八疊球菌抑菌較強(qiáng)（見(jiàn)表1），這可能是由于正丁醇相和水相含有活性較高的抑菌成分，化學(xué)成分較為多樣且含量高?？梢?jiàn),石韋地上部醇提物不同極性部位抑菌活性因萃取溶劑不同、菌種不同而有所差異

8、,這是由于不同極性提取物所含化學(xué)成分的類別和含量不同所致。這4部分對(duì)金黃色葡萄球菌均無(wú)明顯抑菌作用，對(duì)大腸桿菌抑制作用較弱，而石油醚相對(duì)這5種供試菌均無(wú)明顯抑菌作用。醋酸乙酯相對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌沒(méi)有抑菌作用，正丁醇相對(duì)金黃色葡萄球菌也沒(méi)明顯抑菌作用。對(duì)照實(shí)驗(yàn)均無(wú)明顯抑菌環(huán)，地上部醇提物不同極性部位對(duì)霉菌均無(wú)明顯抑菌作用。表1石韋地上部醇提物不同極性部位對(duì)8種菌的抑制作用（略）3.2最小抑菌濃度比較由表2可