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1、蒲公英提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文潘見(jiàn)，梁娟，謝慧明，張文成【摘要】目的以綠原酸和咖啡酸為定量指標(biāo)，建立蒲公英提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法（TLC）為蒲公英提取物制定定性鑒別方法；采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其中的綠原酸和咖啡酸含量。結(jié)果綠原酸在0.003125~0.05mg/ml與峰面積具有良好的線性關(guān)系，R2=0.9995?？Х人嵩?.003125~0.05mg/ml與峰面積具有良好的線性關(guān)系，R2=0.9999。綠原酸和咖啡酸平均回收率分別為98.89％和99.65％，RSD分別為1.05％和1.34％。結(jié)論建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠.freelarke
2、rs.Methods#702型手動(dòng)進(jìn)樣針，pol，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過(guò)，濾液用醋酸乙酯振搖提取2次，10ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。2.1.2對(duì)照品溶液的制備取咖啡酸對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。2.1.3薄層層析吸取上述3種溶液各6μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢測(cè)。供試品色譜中，在與對(duì)照品
3、相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2.2含量測(cè)定2.2.1色譜條件色譜柱為AgilentHypersilODS柱，（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相為甲醇－磷酸鹽緩沖液（pH4.0）：（23∶77），檢測(cè)波長(zhǎng)323nm，柱溫25℃，流速為1.0ml/min。靈敏度：1.0AUFS；理論塔板數(shù)按咖啡酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000，咖啡酸峰與其他峰能達(dá)到基線分離，且出峰時(shí)間適宜，峰形較好。2.2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對(duì)照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖
4、勻，即得0.025mg/ml的對(duì)照品溶液。2.2.3供試品溶液的制備取蒲公英提取物干粉0.5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加含5％甲酸的甲醇溶液50ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250in，取出，放冷，再稱定重量，用含5％甲酸的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，濾液置棕色量瓶中，即得。2.2.4線性關(guān)系考察分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對(duì)照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再用甲醇逐級(jí)稀釋得0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125mg
5、/ml5個(gè)不同濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定其峰面積，然后分別以綠原酸和咖啡酸的濃度為橫坐標(biāo)，5次測(cè)定峰面積的均值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為綠原酸：Y＝3×107X-24923,R2=0.9995；咖啡酸：Y＝5×107X+8862.3,R2=0.9999。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明綠原酸和咖啡酸的濃度在0.003125～0.05mg/ml范圍內(nèi)均與所測(cè)得的相應(yīng)峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次。按上述色譜條件測(cè)定綠原酸的峰面積分別為735557，723229，730246，735043，720147，724
6、230，RSD＝0.89％?？Х人岬姆迕娣e分別為1255324，1275697，1267064，1270335，1292704，1243824，RSD＝1.33%。結(jié)果表明本方法的精密度良好。2.2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液，按上述色譜條件，每隔1h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次。綠原酸峰面積分別為505928，506310，510911，515970，518800，510034，RSD＝1.01％。咖啡酸的峰面積為798944，797559，803781，811651，820222，816674，RSD＝1.17％。結(jié)果表明，綠原酸和咖啡酸的峰面積在5h內(nèi)無(wú)明顯變化，供試
7、品溶液穩(wěn)定性好。對(duì)照品及供試品色譜圖見(jiàn)圖1~2。2.2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，平行實(shí)驗(yàn)6次，測(cè)得綠原酸含量為1.775，1.734，1.808，1.750，1.788，1.75，RSD＝1.52％?？Х人岷繛?.606，1.583，1.628，1.567，1.613，1.601，RSD＝1.36％。結(jié)果表明，在同一條件下，6次測(cè)得樣品綠原酸含量及咖啡酸含量一致，本方法重復(fù)性好。圖1對(duì)照品色譜圖（略）圖2供試品色譜圖（略）2.2.8回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取已知含量的樣品6份，每份0.5g，分別精密添加綠原酸對(duì)照品1.8mg和
