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1、異體脫蛋白松質(zhì)骨復(fù)合纖維蛋白BMP修復(fù)兔橈骨缺損【摘要】探討以纖維蛋白復(fù)合脫蛋白松質(zhì)骨作為骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)的載體修復(fù)兔節(jié)段性骨缺損。［方法］于36只青紫藍(lán)兔兩側(cè)橈骨干處造成1.5cm缺損，采用三種方法進(jìn)行處理：A組，植入脫蛋白松質(zhì)骨、纖維蛋白、BMP的復(fù)合物；B組，植入脫蛋白松質(zhì)骨；C組，空白對(duì)照。術(shù)后2、4、8、12、16周進(jìn)行放射學(xué)、組織學(xué)和電鏡檢查。［結(jié)果］A組骨缺損區(qū)在成骨活躍程度、骨再生量和再生髓腔結(jié)構(gòu)等方面均顯著優(yōu)于B組，使骨缺損得到了較徹底的修復(fù)。B、C兩組均不能產(chǎn)生骨性愈合。［
2、結(jié)論］脫蛋白松質(zhì)骨復(fù)合纖維蛋白是較理想的BMP載體材料，以三者的復(fù)合物修復(fù)骨缺損可達(dá)到滿意效果。.L.編輯。【關(guān)鍵詞】脫蛋白松質(zhì)骨纖維蛋白BMP組織工程骨缺損修復(fù)Abstract［Objective］TorepairsegmentalbonedefectorphogeicprotEIn(BMP)andfibrin.［Method］Bonedefectsplantations:A,positeofdeproteinisedcancellousbone,BMPandfibrin;B,ofdeprotein
3、isedcancellousbone;C,blankcontrol.Thedefectsicroscopy,andelectron-microscopyat2,4,8,12,16plantationregeneratedmuchmoreneplantationandgotpletelyrepaired16plantationcouldn’tgetosseoustissuehealing.［Conclusion］Thepositeofdeproteinisedcancellousbone,bonemor
4、phogeicprotein(BMP)andfibrincanbeeffectivelyusedtorepairsegmentalbonedefect.Keyorphogeicprotein(BMP);tissueengineering;bonedefect;repair骨具有再生和修復(fù)能力，因腫瘤切除、外傷、骨異常生長(zhǎng)所造成的骨缺損，在單純依靠骨自行修復(fù)無(wú)法愈合的情況下，則需采用手術(shù)治療。自體骨移植是一種較好的治療方法，已被廣泛應(yīng)用于臨床。但其來(lái)源有限，不能滿足臨床需求，而且對(duì)患者造成創(chuàng)傷，于是人們
5、把眼光轉(zhuǎn)向能促進(jìn)組織或細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和增殖的材料。本實(shí)驗(yàn)就異體脫蛋白松質(zhì)骨復(fù)合纖維蛋白、BMP修復(fù)兔橈骨缺損的方法和機(jī)制進(jìn)行探討，以評(píng)價(jià)復(fù)合材料作為骨組織工程材料的作用。1材料和方法1.1植入材料的制備1.1.1異體松質(zhì)骨的制備取青紫藍(lán)兔(蘭州生物制品研究所提供)脊柱骨、骨盆骨、長(zhǎng)骨干骺端，剔除骨膜和軟組織，去除其表面皮質(zhì)骨，制成直徑約0.5cm×0.5cm×0.5cm大小松質(zhì)骨顆粒，用流動(dòng)自來(lái)水反復(fù)沖洗骨粒4～5h，致無(wú)血漬浸出為止，將其放入蒸餾水三角瓶中，搖床上震動(dòng)4～5h。其間每30min換蒸餾
6、水一次，再將其放入超聲波清洗機(jī)中反復(fù)進(jìn)行清洗，每次30min，清洗3～5次，自然晾干后，將其放入甲醇與氯仿(1∶1)混合液中，不時(shí)攪拌，12h更換混合液，倒棄混合液，蒸餾水沖洗骨粒3次，自然晾干。用0.6mol/LHCL脫鈣5min，蒸餾水沖洗3次，自然晾干，轉(zhuǎn)入30%過(guò)氧化氫中，不時(shí)攪拌，12h更換過(guò)氧化氫液一次，處理24h，蒸餾水沖洗3次，自然晾干，轉(zhuǎn)入-80℃深低溫冰箱冷凍保存。1.1.2BMP及纖維蛋白的提取按照Urist［1］報(bào)道的方法從小牛新鮮皮質(zhì)骨中提取，提取物置-4℃保存。纖維蛋白原用
7、冷沉淀法自同種異體兔的血液中提?。?］。采集15只健康成年青紫藍(lán)兔的抗凝全血并于3000r／min，離心10min，分離出血清，置-30℃冰箱凍存過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)入4℃冰箱緩慢融解，待徹底融解后，于4℃條件下離心，收集冷沉淀。冷沉淀用冷凍干燥機(jī)凍成干粉，再用重蒸水溶解，配成120mg／ml的纖維蛋白原溶液。1.1.3脫蛋白松質(zhì)骨／BMP復(fù)合物的制備將深低溫保存的異體脫蛋白松質(zhì)骨取出，冷凍干燥機(jī)干燥，裝入培養(yǎng)皿中，1.0×106rads60Co輻照(蘭州輻照中心)，將100mg提取的小牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白溶于1
8、0mL的4mol/L的鹽酸胍溶液中，加入10g異體松質(zhì)骨顆粒，4℃，充分?jǐn)嚢杌靹蛞后w與固體成分，置冷凍干燥機(jī)內(nèi)抽真空、透析、凍干24h，分裝。1.1.4脫蛋白松質(zhì)骨／BMP／纖維蛋白復(fù)合物的制備將處理好的異體脫蛋白松質(zhì)／BMP復(fù)合物置于圓柱形模板內(nèi)，浸沒于纖維蛋白原中，按纖維蛋白膠的制備比例混入凝血酶，復(fù)合支架制備成功。1.2試驗(yàn)方法選用青紫藍(lán)兔36只，體質(zhì)量2～3kg不等，雌雄不限，隨機(jī)分為3組。在無(wú)菌手術(shù)室中，速眠新-Ⅱ麻醉滿意后，常規(guī)去毛、消毒、鋪
