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1、糖皮質(zhì)激素致星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的快速升高作者：李茂全，王艷艷，楊書，陳朝瓊，楊曉虹，余爭平【關(guān)鍵詞】應(yīng)激；糖皮質(zhì)激素；星形細(xì)胞；鈣 Rapidelevationofintracellularfreecalciumconcentrationinastrocytesaftertreatedbyglucocorticoid【Abstract】AIM:Toexplorethemechanismsofglucocorticoid(GC)leadingtotheelevationofintracellularfreecalciumconcentration(［Ca2+］
2、i)inastrocytesinearlyeffectphase.METHODS:AcellculturemodelofneonatalDA),MK801andBSACORT,respectively,changesof［Ca2+］iinastrocytesicroscope.RESULTS:CORTinducedrapidelevationofintracellularCa2+fluorescenceintensityin（177.1±3.8，P<0.01)paredentostthesameeffectastheCORTtreatment（200.7±
3、12.2,P<0.01).CONCLUSION:TherapideffectofGCinducessignificant［Ca2+］ielevationinastrocytesduringstress,andmaybeNMDAreceptorinvolvesinthisprocess.【Key【摘要】目的：研究應(yīng)激水平的糖皮質(zhì)激素（GC）在早期快速效應(yīng)中對星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度（［Ca2+］i）的影響及作用機制.方法：原代培養(yǎng)新生DA)，受體拮抗劑5甲基二氫丙環(huán)庚烯亞胺馬來酸(MK801)，牛血清白蛋白偶聯(lián)CORT（BSACORT）及無細(xì)胞外鈣等干
4、預(yù)組,進(jìn)一步檢測［Ca2+］i變化.結(jié)果：與未處理對照細(xì)胞（141.2±4.7）相比，CORT可快速介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)熒光強度增加（177.1±3.8，P<0.01)，但細(xì)胞外鈣為零時無明顯變化（148.5±6.3）；NMDA受體激活可使熒光強度進(jìn)一步增強(195.3±7.2，P<0.01)，NMDA受體拮抗劑MK801可部分拮抗熒光強度升高(186.4±1.8)；BSACORT可產(chǎn)生與CORT類似的效應(yīng)（200.7±12.2，P<0.01).結(jié)論：應(yīng)激水平的GC在早期可快速增加星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)［Ca2+］i，激活NMDA受體是其中的重要機制之
5、一.【關(guān)鍵詞】應(yīng)激；糖皮質(zhì)激素；星形細(xì)胞；鈣星形膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)（centralnervoussystem,S）內(nèi)數(shù)量最多的細(xì)胞，廣泛參與S內(nèi)信息的處理與傳導(dǎo)，并在神經(jīng)退行性疾病、腦老化及外傷、炎癥等病變的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色［1］.糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid，GC）發(fā)揮作用可通過早期（30min以內(nèi)）的非基因組效應(yīng)和后期的基因組效應(yīng)［2］.有2結(jié)果2.1原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定體外原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，在顯微鏡下呈單層生長，互不重疊.采用間接免疫熒光法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的特征性抗原GFAP，結(jié)果顯示表達(dá)陽性率>95%.提示所分離的
6、星形膠質(zhì)細(xì)胞純度高（圖1）.圖1間接免疫熒光法鑒定培養(yǎng)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞純度×2002.2CORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞引起細(xì)胞內(nèi)鈣的動態(tài)變化熒光指示劑Fluo3與游離鈣結(jié)合后，在激光共聚焦顯微鏡下可見處理前星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)較低的熒光強度（141.2±4.7），加入1μmol/LCORT處理10min星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)熒光強度有顯著增強（177.1±3.8，P<0.01，圖2）.但外鈣為零時，熒光強度無明顯變化（148.5±6.3），差異無統(tǒng)計學(xué)意義.說明CORT誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣升高是以外鈣內(nèi)流為主而非內(nèi)鈣釋放（圖3）.2.3CORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞及NMDA，M
7、K801A:未處理對照組;B:1μmol/LCORT處理10min組.2.4BSACORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞引起細(xì)胞內(nèi)鈣的變化結(jié)果顯示，加入1μmol/LBSACORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)熒光強度明顯增強（200.7±12.2），影響具有顯著性（P<0.01，圖5).3討論星形膠質(zhì)細(xì)胞在S內(nèi)的代謝、營養(yǎng)、支持、調(diào)節(jié)突觸等活動中發(fā)揮重要作用.GC的急性升高一方面可能通過快速效應(yīng)直接損傷神經(jīng)元的功能；另一方面，GC對星形膠質(zhì)細(xì)胞的快速作用間接損傷神經(jīng)元的功能.本實驗選擇星形膠質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)鈣變化作為效應(yīng)指標(biāo)，觀察其動態(tài)變化的過程.由于星形膠質(zhì)細(xì)胞的A:未處理對照
8、組;B:1μmol/LB
