資源描述:
《糖皮質(zhì)激素致星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的快速升高》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、糖皮質(zhì)激素致星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的快速升高作者:李茂全,王艷艷,楊書,陳朝瓊,楊曉虹,余爭平【關(guān)鍵詞】應(yīng)激;糖皮質(zhì)激素;星形細(xì)胞;鈣 Rapidelevationofintracellularfreecalciumconcentrationinastrocytesaftertreatedbyglucocorticoid【Abstract】AIM:Toexplorethemechanismsofglucocorticoid(GC)leadingtotheelevationofintracellularfreecalciumconcentration([Ca2+]
2、i)inastrocytesinearlyeffectphase.METHODS:AcellculturemodelofneonatalDA),MK801andBSACORT,respectively,changesof[Ca2+]iinastrocytesicroscope.RESULTS:CORTinducedrapidelevationofintracellularCa2+fluorescenceintensityin(177.1±3.8,P<0.01)paredentostthesameeffectastheCORTtreatment(200.7±
3、12.2,P<0.01).CONCLUSION:TherapideffectofGCinducessignificant[Ca2+]ielevationinastrocytesduringstress,andmaybeNMDAreceptorinvolvesinthisprocess.【Key【摘要】目的:研究應(yīng)激水平的糖皮質(zhì)激素(GC)在早期快速效應(yīng)中對星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+濃度([Ca2+]i)的影響及作用機制.方法:原代培養(yǎng)新生DA),受體拮抗劑5甲基二氫丙環(huán)庚烯亞胺馬來酸(MK801),牛血清白蛋白偶聯(lián)CORT(BSACORT)及無細(xì)胞外鈣等干
4、預(yù)組,進(jìn)一步檢測[Ca2+]i變化.結(jié)果:與未處理對照細(xì)胞(141.2±4.7)相比,CORT可快速介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)熒光強度增加(177.1±3.8,P<0.01),但細(xì)胞外鈣為零時無明顯變化(148.5±6.3);NMDA受體激活可使熒光強度進(jìn)一步增強(195.3±7.2,P<0.01),NMDA受體拮抗劑MK801可部分拮抗熒光強度升高(186.4±1.8);BSACORT可產(chǎn)生與CORT類似的效應(yīng)(200.7±12.2,P<0.01).結(jié)論:應(yīng)激水平的GC在早期可快速增加星形膠質(zhì)細(xì)胞胞內(nèi)[Ca2+]i,激活NMDA受體是其中的重要機制之
5、一.【關(guān)鍵詞】應(yīng)激;糖皮質(zhì)激素;星形細(xì)胞;鈣星形膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem,S)內(nèi)數(shù)量最多的細(xì)胞,廣泛參與S內(nèi)信息的處理與傳導(dǎo),并在神經(jīng)退行性疾病、腦老化及外傷、炎癥等病變的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色[1].糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)發(fā)揮作用可通過早期(30min以內(nèi))的非基因組效應(yīng)和后期的基因組效應(yīng)[2].有2結(jié)果2.1原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度鑒定體外原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞,在顯微鏡下呈單層生長,互不重疊.采用間接免疫熒光法檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的特征性抗原GFAP,結(jié)果顯示表達(dá)陽性率>95%.提示所分離的
6、星形膠質(zhì)細(xì)胞純度高(圖1).圖1間接免疫熒光法鑒定培養(yǎng)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞純度×2002.2CORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞引起細(xì)胞內(nèi)鈣的動態(tài)變化熒光指示劑Fluo3與游離鈣結(jié)合后,在激光共聚焦顯微鏡下可見處理前星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)較低的熒光強度(141.2±4.7),加入1μmol/LCORT處理10min星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)熒光強度有顯著增強(177.1±3.8,P<0.01,圖2).但外鈣為零時,熒光強度無明顯變化(148.5±6.3),差異無統(tǒng)計學(xué)意義.說明CORT誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)鈣升高是以外鈣內(nèi)流為主而非內(nèi)鈣釋放(圖3).2.3CORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞及NMDA,M
7、K801A:未處理對照組;B:1μmol/LCORT處理10min組.2.4BSACORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞引起細(xì)胞內(nèi)鈣的變化結(jié)果顯示,加入1μmol/LBSACORT處理星形膠質(zhì)細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)熒光強度明顯增強(200.7±12.2),影響具有顯著性(P<0.01,圖5).3討論星形膠質(zhì)細(xì)胞在S內(nèi)的代謝、營養(yǎng)、支持、調(diào)節(jié)突觸等活動中發(fā)揮重要作用.GC的急性升高一方面可能通過快速效應(yīng)直接損傷神經(jīng)元的功能;另一方面,GC對星形膠質(zhì)細(xì)胞的快速作用間接損傷神經(jīng)元的功能.本實驗選擇星形膠質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)鈣變化作為效應(yīng)指標(biāo),觀察其動態(tài)變化的過程.由于星形膠質(zhì)細(xì)胞的A:未處理對照
8、組;B:1μmol/LB