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1、異丙酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡的影響論文【摘要】目的：研究異丙酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡的影響.方法：SD大鼠60只，體質(zhì)量290~310g,隨機(jī)分為假手術(shù)組、異丙酚組和對照組，每組20只.用改良Longa法制成鼠腦缺血/再灌注模型（缺血2h，再灌2h）,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，TUNEL法觀察細(xì)胞凋亡變化.結(jié)果：光鏡檢查異丙酚組細(xì)胞腫脹壞死明顯減輕，凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞明顯減少.再灌2h后對照組凋亡細(xì)胞比率、凋亡細(xì)胞陽性率、TUNEL陽性率均較假手術(shù)組高(P0.01)，異丙酚組凋亡細(xì)胞陽性率、TUNEL陽性率較對照
2、組減少（P0.05）.結(jié)論：異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡壞死的作用.【關(guān)鍵詞】二異丙酚；大鼠；腦缺血；再灌注損傷0引言異丙酚能降低腦血流量、腦耗氧量和顱內(nèi)壓,是臨床上腦損傷外科手術(shù)麻醉以及腦中風(fēng)患者躁動鎮(zhèn)靜的常用藥物之一.研究證實(shí),麻醉劑量異丙酚對實(shí)驗(yàn)性大鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用［1］,也有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),鎮(zhèn)靜劑量異丙酚能明顯改善大鼠腦缺血的形態(tài)學(xué)變化［2］.其作用機(jī)制是多途徑、多位點(diǎn)的.freelL/L水合氯醛300mg/kg麻醉,頸部正中切口,分離左頸總動脈及其分叉處,凝斷頸外動脈(ECA)的3個(gè)主要分支,游
3、離ECA,兩端結(jié)扎,靠近遠(yuǎn)心端將其剪斷,.freelm.此時(shí)大腦中動脈(MCA)起始處被阻斷,同時(shí)也阻斷了來自ICA,ACA,PCA的側(cè)副血流,導(dǎo)致MC區(qū)局部缺血，完成局灶腦缺血步驟.腦缺血成功的標(biāo)志為動物蘇醒后出現(xiàn)同側(cè)的Horner征和對側(cè)以前肢為重的偏癱.缺血2h后撥出尼龍線恢復(fù)MCA血流,完成再灌注步驟.手術(shù)過程觀察呼吸節(jié)律,用加熱燈保持大鼠肛溫(37±0.5)℃.假手術(shù)組僅將尼龍線放入ECA,其他操作相同.異丙酚組于缺血前10min腹腔注入異丙酚100mg/kg（英國阿斯利康公司提供）.對照組于缺血前腹腔注入等容積生理鹽水.再灌注2h
4、后，開顱取腦，置入40g/L甲醛溶液中固定.1.2方法1.2.1細(xì)胞光鏡觀察灌注后2h后，斷頭取腦，以視交叉前后兩點(diǎn)冠狀切片，片厚約4mm，將腦片放入40g/L甲醛溶液中固定.常規(guī)梯度脫水、透明、包埋、浸蠟、切片厚6μm.HE染色，切片常規(guī)脫蠟至水，蘇木精染色5min，鹽酸乙醇分色30s，伊紅復(fù)染1~2min，水洗、脫水、透明、中性樹膠封片，觀察組織學(xué)變化.1.2.2細(xì)胞凋亡檢測（TUNEL法）原位末端標(biāo)記細(xì)胞凋亡試劑盒由德國BoehringerMannheim公司提供.切片常規(guī)脫蠟至水，按試劑盒說明書操作，DAB顯色2~5min，蘇木素復(fù)染
5、、封片.于光鏡下觀察，TUNEL染色陽性并伴有核染色質(zhì)濃聚、核染色質(zhì)靠邊凝集或凋亡小體形成者為凋亡細(xì)胞；TUNEL染色陽性但呈彌漫著色為壞死細(xì)胞；TUNEL染色陰性為正常細(xì)胞.光鏡下隨機(jī)選取每張切片梗死周邊組織五個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)每1000個(gè)細(xì)胞中TUNEL陽性、凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞數(shù)，計(jì)算TUNEL陽性細(xì)胞的百分率.TUNEL陽性細(xì)胞百分率=TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%.凋亡細(xì)胞陽性率=凋亡細(xì)胞/（TUNEL陽性細(xì)胞+TUNEL陰性細(xì)胞），凋亡細(xì)胞比率=凋亡細(xì)胞/（凋亡細(xì)胞+壞死細(xì)胞）×100%.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以x±s表示，應(yīng)用S
6、PSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)分析組間差異.P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.2結(jié)果2.1形態(tài)學(xué)改變HE染色下，對照組相當(dāng)于缺血中心區(qū)的頂葉、顳葉區(qū)神經(jīng)細(xì)胞染色淡，出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核碎裂、溶解等細(xì)胞壞死特征（圖1A）.相當(dāng)于缺血半暗帶的額葉皮質(zhì)等區(qū)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少、體積縮小，部分胞漿成嗜酸性改變，細(xì)胞間隙增寬，細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)濃縮，邊聚.假手術(shù)組切片未出現(xiàn)上述變化.異丙酚組部分皮質(zhì)部神經(jīng)元結(jié)構(gòu)完整，壞死細(xì)胞和凋亡細(xì)胞減少（圖1B）.A：對照組；B：異丙酚組.圖1神經(jīng)細(xì)胞凋亡TUNEL×400（略）2.2細(xì)胞凋亡對照組皮質(zhì)和紋狀體都可見大
7、量凋亡細(xì)胞，核固縮、碎裂較多.假手術(shù)組未見凋亡細(xì)胞.異丙酚組部分細(xì)胞核固縮、可見核碎裂，部分細(xì)胞可見核仁，與對照組相比，凋亡細(xì)胞減少（P0.05，表1）.表1再灌注2h凋亡細(xì)胞比率、凋亡細(xì)胞陽性率和TUNEL陽性率（略）aP0.05vs對照，bP0.01vs假手術(shù).3討論異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡壞死的作用.異丙酚能減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，具有抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡壞死的作用.缺血性腦損傷的機(jī)制研究已久，研究表明，在腦缺血前10min腹腔注射異丙酚100mg/kg，對大鼠腦缺血再灌注有保護(hù)作用［4］.近年來
8、的研究表明細(xì)胞程序性的死亡即細(xì)胞凋亡在缺血再灌注損傷中起了重要的作用，細(xì)胞凋亡是神經(jīng)細(xì)胞死亡的主要形式，重度長時(shí)間缺血引起神經(jīng)細(xì)胞壞死，輕度短時(shí)間缺血及再灌注可引起
