rhoa基因在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其意義-論文

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1、RhoA基因在肝細(xì)胞肝癌中的表達(dá)及其意義*論文.freelRNA的表達(dá)，同時(shí)采用PCR產(chǎn)物單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP）銀染法檢測(cè)RhoA基因的突變情況。結(jié)果本組42例肝癌組織中RhoAmRNA光密度相對(duì)值明顯高于癌旁肝組織（P0.01）；有門靜脈癌栓者其癌組織中RhoAmRNA光密度相對(duì)值明顯高于無(wú)癌栓者（P0.05）。經(jīng)PCR-SSCP銀染法分析未發(fā)現(xiàn)異常泳動(dòng)條帶。結(jié)論RhoA基因在肝細(xì)胞肝癌進(jìn)展中起重要作用，并可能與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)。【關(guān)鍵詞】肝癌；RhoA；基因表達(dá)；RT-PCR【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpres

2、sionofRhoAgeneinhepatocellularcarcinomaandtoevaluatetherelationshipbeta.MethodsThemRNAexpressionofRhoAgeneinedbyRT-PCRin42casesofhepatocellularcarcinomaandadjacentnon-canceroustissue.Inaddition.freelutationofRhoAgeneinedbyPCR-SSCP.ResultsTheopacitydensity(OD)ofRhoAmRNAexpressioninhepato

3、cellularcarcinomatissuesRNAexpressioninhepatocellularcarcinomaetastasisetastasis(P0.05）.Mutationination.ConclusionTheRhoAgenemayberelatedtomalignanttransformationanddevelopmentofhepatocellularcarcinomaprobablybyoverexpression.【Keya；RhoA；geneexpression；RT-PCR原發(fā)性肝癌發(fā)生率高，手術(shù)切除是目前最主要的治療方法。盡管隨

4、著影像診斷和外科技術(shù)的進(jìn)步，尤其是肝移植在肝癌中的運(yùn)用，肝癌的預(yù)后已經(jīng)有所改善，但肝臟的特殊解剖結(jié)構(gòu)和功能決定著肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)率高，術(shù)后復(fù)發(fā)已成為影響患者預(yù)后的主要問(wèn)題。肝癌侵襲轉(zhuǎn)移是主要的影響因素之一，深入研究肝癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)于改善肝癌患者的總體預(yù)后有重要作用。Rho蛋白和腫瘤發(fā)生有密切的關(guān)系，參與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程。Rho家族屬于Ras超家族，是重要的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子，在細(xì)胞的許多基礎(chǔ)生命活動(dòng)中起關(guān)鍵的作用［1］。目前研究證實(shí)，Rho蛋白特別是RhoA在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，在結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、頭頸癌等均報(bào)道有RhoA表達(dá)的異常增高［2］。本研究利用RT

5、-PCR技術(shù)及分子定量成像系統(tǒng)分析42例肝細(xì)胞肝癌（HCC）病人的肝癌組織及癌旁肝組織中RhoAmRNA的表達(dá)，并探討其臨床意義。1材料與方法1.1材料1.1.1主要試劑及儀器RT-PCR試劑盒購(gòu)自MBI公司；dNTP及DNAmarker購(gòu)自Promega公司；瓊脂糖、TRIzol試劑及DEPC購(gòu)于Gibco公司。凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Genesis公司；UV-3000型紫外分析儀購(gòu)自上海天能科技有限公司；PE-2400TMPCR儀購(gòu)自美國(guó)Perkin。1.1.2標(biāo)本來(lái)源42例患者的原發(fā)性肝癌組織及相對(duì)應(yīng)的癌旁肝組織來(lái)自第四軍醫(yī)大學(xué)附屬第一醫(yī)院2004年8月～2005年

6、3月的新鮮手術(shù)標(biāo)本，離體后30min內(nèi)分裝保存于液氮罐中，所有病例均附癌旁肝組織作為對(duì)照，分別伴有慢性炎癥、纖維化和肝硬化，全部標(biāo)本均經(jīng)病理科醫(yī)師切片確診。1.2方法1.2.1擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)以GenBank中人RhoA基因全長(zhǎng)序列為模板，按引物設(shè)計(jì)原則予以設(shè)計(jì)，采用Primerpremier5.0軟件設(shè)計(jì)，其序列如下（U，D分別表示上游和下游引物）：RhoAU15’CTGGTGATTGTTGTTGGTGATGG3’，U25’GATTCGTTGCCTGAGCAATG3’，D5’GCGATCATAATCTT-CCTGCC3’。Bactin引物序列：上游引物，5’CGGGA

7、AATC-GTGAT3’；下游引物，5’GAACTTTGGGGGATGCTCGC3’。其中U1、U2為RhoA上游引物，分別用于定量RT-PCR和PCR-SSCP，D為下游引物。RhoA產(chǎn)物分別為183bp和221bp。1.2.2總RNA提取組織總RNA的抽提?。?.5g組織塊，加入Trizol試劑1ml，在電動(dòng)玻璃勻漿器中，充分勻漿。將全部勻漿液轉(zhuǎn)入1ml離心管中，加0.25ml氯仿，充分振蕩混勻，冰浴15min。低溫13000r/min離心15min。小心吸取上層水相至另一1.5ml離心管中，注意不要吸到蛋白層或有機(jī)相，加等體積異丙醇，搖勻，室溫