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《還原型谷胱甘肽對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、還原型谷胱甘肽對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響作者：王進(jìn)，王一彪，楊海英，趙麗麗，孔春妍【摘要】目的研究還原型谷胱甘肽對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(A/R)損傷的影響。方法建立心肌細(xì)胞A/R損傷模型，隨機(jī)分為５組：A組，正常對(duì)照組；B組，單純?nèi)毖?復(fù)氧(A/R低氧2h，復(fù)氧1h)組；C、D、E組為還原型谷胱甘肽處理組，加入還原型谷胱甘肽(GSH)分別使其終濃度為40、80、160mg/L，后A/R。于復(fù)氧后測(cè)定各組培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)變化及細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量和細(xì)胞存活率。結(jié)果與正常組相比，單純低氧/復(fù)氧組LDH漏出量、MDA水平顯著升高(P
2、<0.01)，細(xì)胞存活率顯著降低(P<0.01)。與缺氧/復(fù)氧組比較，各谷胱甘肽處理組上述變化明顯減輕(P<0.05)。結(jié)論還原型谷胱甘肽對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞A/R損傷具有保護(hù)作用，并具有濃度依賴性?！娟P(guān)鍵詞】還原型谷胱甘肽心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧Theeffectsofreducedglutathionesodiumonanoxia/reoxygenationinjuriesofneonatalratcardiomyocytes【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofreducedglutathionesodium(
3、GSH)onanoxia/reoxygenationinjuriesofneonatalratcardiomyocytes.MethodsA/Rmodelofmyocardialcellsofneonatalratslydividedintofivegroups:controlgroup(A):ent;A/Rgroup(B):2-houranoxiafolloediumtillthefinalconcentrationof40mg/LthenA/R;GSHconditionedgroup(D):addingGSHintoculturemediumtillth
4、efinalconcentrationof80mg/LthenA/R;GSHconditionedgroup(E):addingGSHintoculturemediumtillthefinalconcentrationof160mg/LthenA/R.Theactivityoflactatedehydrogenase(LDH)，thecontentsofcellularmelondadehyde(MDA)andtherateofcellviabilityofeachgroupyocytesinaconcentrationdependentmanner.【Ke
5、ycardiomyocytesanoxiareoxygenation1材料與方法1.1材料實(shí)驗(yàn)用1～3天的EM培養(yǎng)基由愛博公司出品；胎牛血清為美國(guó) Gibco公司出品；胰酶為Sigma公司出品；丙二醛（MDA），乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒均購(gòu)自南京建成生物研究所；還原型谷胱甘肽（古拉定）由LaboratorioFarmaceuticoC.T.S.R.1生產(chǎn)(批號(hào)：4027)。1.2乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)菌取出生1～3天大鼠乳鼠心臟，剪碎后用0.25％胰酶消化4～5次，取除第1次以外的上清，用含15％胎牛血清的高糖DMEM中止消化，離心取心肌細(xì)胞沉淀，加入培養(yǎng)液，
6、集中混勻制成懸液，應(yīng)用差速貼壁法分離純化心肌細(xì)胞，以5×105/ml的培養(yǎng)密度接種于２４孔培養(yǎng)板中，在CO２培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，48h后換液。1.3實(shí)驗(yàn)分組及操作程序試驗(yàn)分為５組，每組重復(fù)８孔，A組為正常對(duì)照組（培養(yǎng)板置培養(yǎng)箱中持續(xù)孵育3h結(jié)束實(shí)驗(yàn)）；B組為單純?nèi)毖酰瘡?fù)氧組（A/R缺氧2h，復(fù)氧1h）：將培養(yǎng)板置于充有99.５％氮?dú)獾娜毖醴跤髦?7℃密閉培養(yǎng)2h，再以９5％氧氣＋５％二氧化碳進(jìn)行復(fù)氧1h；C組，D組，E組為古拉定處理組，加入古拉定使其終濃度分別為40、80、160mg/L。各組缺氧前、復(fù)氧前均給藥。1.4實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)(1)計(jì)數(shù)細(xì)胞搏動(dòng)：在倒置顯微
7、鏡觀察并計(jì)數(shù)心肌細(xì)胞搏動(dòng)的頻率及節(jié)律。(2)細(xì)胞存活率計(jì)數(shù)：采用臺(tái)盼藍(lán)排斥法檢測(cè)，各組取少許細(xì)胞混懸液，0.4%臺(tái)盼藍(lán)混勻2min，按白細(xì)胞計(jì)數(shù)法在光鏡下計(jì)數(shù)藍(lán)染細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)攝取率＝藍(lán)染細(xì)胞／（藍(lán)染細(xì)胞＋未藍(lán)染細(xì)胞）×100%。(3)LDH及MDA活性及含量測(cè)定：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后按試劑盒說(shuō)明測(cè)定。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)2結(jié)果2.1古拉定對(duì)缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞搏動(dòng)的影響正常培養(yǎng)對(duì)照組心肌細(xì)胞搏動(dòng)相對(duì)恒定，節(jié)律規(guī)則；A/R組心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率減慢，搏動(dòng)幅度減弱，節(jié)律不齊，有部分停搏，與對(duì)照組相比，差異有非常顯著性（P<0.01)；各古拉定處理組
8、明顯逆轉(zhuǎn)A/R損傷造成的搏動(dòng)頻率和節(jié)律異常，與A/R
