赤眼蜂寄生與玉米螟胚胎發(fā)育的關(guān)系.doc

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1、赤眼蜂寄生與玉米螟胚胎發(fā)育的關(guān)系*利翠英以蓖麻蠶卵為寄主，對赤眼蜂的個體發(fā)育過程進行了研究。結(jié)果指出，如果赤眼蜂在寄主胚胎發(fā)育早期（即胚胎反轉(zhuǎn)期之前）進行寄生，則正在發(fā)育的寄主胚胎停止發(fā)育，而赤眼蜂卵得到正常發(fā)育；[1]。筆者曾采用玉米螟赤眼蜂（Trichogrammaostriniae）早期寄生亞洲玉米螟（Ostriniafurnacalis）卵，并測定其卵內(nèi)保幼激素酯酶（Juvenilehormoneesterase,JHE）活力的變化，證實玉米螟赤眼蜂對亞洲玉米螟卵的早期寄生屬“抑性寄生”[2]。本研究為探討赤眼蜂在不同時間寄生對

2、亞洲玉米螟卵胚胎發(fā)育的調(diào)控作用，筆者通過測定赤眼蜂不同時間寄生后，亞洲玉米螟卵內(nèi)JHE活力變化，對比赤眼蜂不同時間寄生的寄生發(fā)生率以及寄生后赤眼蜂與寄主的發(fā)育情況，來闡明赤眼蜂的寄生特點。1材料與方法1.1材料玉米螟赤眼蜂（T.ostriniae）引自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)。用米蛾(CorcyracephaloniaStainton)卵繁殖。置于15L:9D、(25±1)℃、RH為80%左右的光照培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)。試驗中所用的赤眼蜂為一日齡雌蜂。亞洲玉米螟引自中國農(nóng)科院植物保護研究所，參照周大榮等[3]的方法,在室內(nèi)用人工飼料飼養(yǎng)。試驗中所用的卵塊為

3、產(chǎn)后當日的卵塊。1.2試驗方法1.2.1赤眼蜂不同時間寄生的寄生發(fā)生率以及寄生后赤眼蜂與寄主的發(fā)育情況：用硫酸紙收集新鮮的（產(chǎn)后12h內(nèi)）、直徑約0.5cm的亞洲玉米螟卵塊，剪去周圍多余的硫酸紙，將2塊帶卵的硫酸紙粘附于3cm×3cm九宮格紙的對角上制作成一張卵卡。引入羽化24h內(nèi)經(jīng)群體交尾后的玉米螟赤眼蜂雌蜂一頭，并在管內(nèi)放置浸過10%蜂蜜水的脫脂棉球，管口用外包紗布的脫脂棉球封口。然后將玻璃管放入溫度（25±1）℃、RH50%～80%、15L:9D的光照恒溫培養(yǎng)箱中，24h后除去雌蜂。每24h檢查一次玉米螟或蜂的發(fā)育情況。赤眼蜂開始

4、羽化后，每12h觀察一次，并將羽化蜂引出，最后解剖剩余玉米螟卵，統(tǒng)計寄生率。1.2.2待測樣品的取樣方法：取當日的卵塊按產(chǎn)卵后24，48，60，72，84h大量接蜂。3h后去除赤眼蜂，接種后每隔12h取待測樣品，直至96h后亞洲玉米螟卵孵化或144h左右赤眼蜂羽化，實驗組分別取樣9、8、7、6次；對照組（未寄生卵）同時取樣,因96h后亞洲玉米螟卵已孵化，故從0至96h僅取樣9次。所取樣品卵與對照卵立即置于液氮罐中保存。1.2.3保幼激素酯酶活力測定：JHE活力測定采用放射化學(xué)法(RC)[4]。按每mL緩沖液60mg卵塊的比例，用pH7.

5、0的0.1mol﹒L-1的磷酸緩沖液進行卵塊的冰浴勻漿，超聲波破碎5min后靜置過夜，離心制備待測液。將待測液加入稀釋后的3H.-JHI標樣溶液中。經(jīng)(29±1)℃溫浴30min后用堿性甲醇溶液中止反應(yīng)；渦旋振蕩后加入異辛烷振蕩萃取10min，4000r﹒min-1離心15min。吸取上清液和下層液各50μL置于閃爍瓶中，加入5mL親水型閃爍液，由BeckmanLS—9800型液體閃爍計數(shù)器用H數(shù)法校準測定放射性活度（Bq）。所用試劑：3H-JHⅠ（10C）由美國杜邦原子能研究所合成（中國科學(xué)院動物研究所提供），放射性比活度為444.0

6、GBq﹒mmol-1，用異辛烷稀釋后使用。異辛烷為國產(chǎn)分析純試劑；磷酸緩沖液，堿性甲醇，親水型閃爍液（PPO5g，POPOP0.5g，二甲苯665mL，TritonX-100335mL）。除TritonX-100為Amresco進口分裝外，其余均由國產(chǎn)分析純試劑配制。測定重復(fù)3次。1.3數(shù)據(jù)處理用Statistic6.0中的ANOVA進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，對于大于70%或小于30%的百分數(shù)，先進行反正弦轉(zhuǎn)換，然后再進行統(tǒng)計分析。寄生發(fā)生率用U測驗進行差異顯著性檢驗。蜂羽化率（%）=赤眼蜂羽化卵數(shù)÷被寄生卵數(shù)×100%；寄生發(fā)生率（%）=發(fā)生

7、寄生蜂數(shù)÷供試蜂總數(shù)×100%2結(jié)果與分析2.1亞洲玉米螟卵的發(fā)育進度觀察對亞洲玉米螟卵發(fā)育的觀察發(fā)現(xiàn)，亞洲玉米螟卵在產(chǎn)下至12h時段其外表呈現(xiàn)乳白色；24h時變成淡黃色；72h時為深黃色，且部分卵內(nèi)出現(xiàn)棕色點；到84h時卵內(nèi)有棕-黑色點出現(xiàn)；96h時幼蟲形態(tài)清晰可見，幼蟲頭部在卵殼內(nèi)左右移動并開始孵化；完成發(fā)育的卵在120h內(nèi)基本全部孵化。2.2赤眼蜂的寄生能力Table1.Percentsofwaspssuccessfullyparasitized(%)Hostage（h）Percentofwaspsthatsuccessfully

8、parasitized（%）TotalwaspsusedintestU-test0-1210030A12-2496.8832A24-3667.8628B48-6072.2236B60-727520B72-8