體內(nèi)烏頭類生物堿毒物檢測(cè)方法概述

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1、體內(nèi)烏頭類生物堿毒物檢測(cè)方法概述【摘要】概述了利用薄層層析法、紫外分光光度法、高效液相色譜法、高效液相－質(zhì)譜聯(lián)用、多級(jí)質(zhì)譜等方法檢測(cè)體內(nèi)烏頭類生物堿毒物的方法，旨在為臨床診斷和鑒定提供有益的借鑒。【關(guān)鍵詞】烏頭；生物堿；毒物檢測(cè)；高效液相色譜法烏頭類生物堿是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜和生物活性較強(qiáng)的中藥成分，絕大部分存在于烏頭屬（Aconitum）和翠雀屬（Delphinium）植物中。烏頭屬植物在我國(guó)有170余種，資源十分豐富，其中有的為常用中藥材，如川烏、草烏、附子等，可用于鎮(zhèn)痛、麻醉、消炎和治療風(fēng)濕等疾病，功效顯著［1］。烏頭類生物堿被認(rèn)為是這

2、些藥材的特征生物活性成分，但大多數(shù)烏頭屬藥材都含有大量的有毒雙酯型烏頭堿［2］。常見的這類雙酯型生物堿的結(jié)構(gòu)見圖1，其中烏頭堿為此類藥材中廣泛存在且含量較高的一種。由于炮制、誤服或投毒等原因而引起烏頭堿中毒的情況很多，口服烏頭堿0.2mg即可引起中毒，致死量為2～5mg［3］，治療量與中毒量或致死量接近［4］。僅1980年以來(lái)在國(guó)內(nèi)報(bào)道的懷疑是烏頭堿中毒的案例達(dá)數(shù)萬(wàn)宗，并有大量中毒案例未予報(bào)道［5］。這些案例涉及中毒的臨床鑒定，鑒定的目的是判定其攝入量是否超出治療量范圍，而這個(gè)過(guò)程的關(guān)鍵是要準(zhǔn)確地檢測(cè)出體內(nèi)烏頭類生物堿的殘留量。由于烏頭堿在

3、體內(nèi)分解代謝迅速(半衰期t1/2為2min)，而且烏頭堿中毒亦無(wú)特異性臨床表現(xiàn)，中毒劑量也因個(gè)體差異有很大的不同，臨床診斷往往缺少科學(xué)依據(jù)。近年來(lái)由于科技的進(jìn)步，為體內(nèi)烏頭堿毒物的檢測(cè)提供了新方法和新技術(shù)。本文概述了檢測(cè)體內(nèi)烏頭類生物堿毒物的方法，為臨床診斷和鑒定提供有益的借鑒。　　1傳統(tǒng)方法20世紀(jì)80年代以前對(duì)烏頭類生物堿的檢測(cè)方法，已報(bào)道的有浸漬紙色譜法［6］、氣相色譜法［7］、薄層掃描法［8］、微量結(jié)晶法［9］、薄層層析法［9］、比色法［9］、紫外分光光度法［9］和紅外光譜法［9］等，這些方法或者分離不完全，測(cè)量誤差大，或者靈敏度不

4、高，操作繁瑣，或者樣品需要量大，預(yù)處理繁瑣。1985年，王月娥等［10］就利用放射性標(biāo)記法、藥代動(dòng)力學(xué)模型和紙層析分析法詳細(xì)研究過(guò)3-乙酰烏頭堿在小鼠體內(nèi)的代謝過(guò)程，并獲得了幾個(gè)結(jié)果。①血藥濃度：利用動(dòng)力學(xué)模型算出了該化合物在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。②組織含量：在注射5min后膽囊中3-乙酰烏頭堿含量最高，之后依次是肝、腎、肺和脾，心臟和腦最低；3h后膽囊中含量明顯升高，約為5min時(shí)含量的2.3倍；24h后膽囊含量明顯降低，而其它組織中含量降低不明顯。給藥5d后各組織中仍有一定量，直至7d后臟器中含量才接近衡量。③排泄?jié)舛龋簩?duì)小鼠給藥30m

5、in后尿內(nèi)已有生物堿排出，12h和24h后尿內(nèi)生物堿排出量分別為（22±5）％和（27±4）％，3-乙酰烏頭堿原型排出量分別為（5.2±1.0）％和（6.2±10）％。④與血漿蛋白的結(jié)合：結(jié)果表明3-乙酰烏頭堿與血漿蛋白的結(jié)合率為（28.5±2.5）％。⑤代謝：3-乙酰烏頭堿進(jìn)入體內(nèi)后發(fā)生代謝分解，以多種形式存在，有3-乙酰烏頭堿原型物、烏頭堿和其它烏頭類生物堿，表明其進(jìn)入體內(nèi)后并非立即發(fā)生全部3位脫乙?；D(zhuǎn)化為烏頭堿。以上結(jié)論雖然僅針對(duì)3-乙酰烏頭堿的代謝，但提供了研究烏頭生物堿在體內(nèi)代謝過(guò)程和定性分析毒物種類，以及從體內(nèi)代謝物中分析中毒

6、原因提供了重要思路。但該方法繁瑣費(fèi)時(shí)，靈敏度不高而難于推廣。李緒文等［11］從已灌服烏頭堿3h后的家兔膽汁中提取出代謝物，在薄層色譜（TLC）上快速地展開用碘化鉍鉀溶液顯色，進(jìn)行了初步快速研究。實(shí)驗(yàn)表明：①采用的烏頭總堿的提取方法以及TLC檢識(shí)條件均可用于烏頭堿在動(dòng)物體內(nèi)代謝產(chǎn)物的研究，可為因服用烏頭堿類藥物而導(dǎo)致中毒的法醫(yī)學(xué)快速鑒定提供依據(jù)和方法。②給藥3h后，烏頭堿在兔體內(nèi)的代謝產(chǎn)物大量集中在肝臟而不是膽汁中，因此毒物的檢測(cè)應(yīng)重點(diǎn)在肝臟?！　?高效液相色譜法（HPLC）高效液相色譜法是20世紀(jì)60年代末迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)

7、，分離效能高、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高，對(duì)藥物動(dòng)力學(xué)和臨床藥學(xué)研究的重要性越來(lái)越突出。王慕鄒等［12］在1983年就較早地利用HPLC測(cè)定了10種烏頭植物中的烏頭堿、中烏堿和次烏堿的含量。發(fā)現(xiàn)雖然烏頭類生物堿的最大吸收為230nm左右，但在該波長(zhǎng)雜質(zhì)干擾大，而在240nm檢測(cè)基線更穩(wěn)定，可分析各種烏頭中的生物堿含量，為檢測(cè)烏頭類生物堿提供了可行的方法。張興華等［13］初步探索應(yīng)用HPLC以甲醇－0.01mol/L碳酸銨水溶液－二氯甲烷（90∶10∶2）為流動(dòng)相，在ODS反相色譜柱上，以丁卡因?yàn)閮?nèi)標(biāo)，波長(zhǎng)為235nm的紫外光，檢測(cè)了烏頭堿注射

8、入家兔靜脈后血液中的濃度情況，給出了從血液中定量分析烏頭堿的方法。實(shí)驗(yàn)所用乙醚作溶劑來(lái)提取血液中烏頭堿具有雜質(zhì)少、毒性小和便于操作等優(yōu)點(diǎn)；采用丁卡因作內(nèi)標(biāo)較諸之后，在以上方法基礎(chǔ)