資源描述：
《丙泊酚對內(nèi)毒素血癥大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、丙泊酚對內(nèi)毒素血癥大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究TheProtectiveeffectsandmechanismsofpropofolinendotoxemiainducedacuteratkidneyinjury崔文瑤王俊科中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院麻醉科29丙泊酚對內(nèi)毒素血癥大鼠腎損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究目的內(nèi)毒素血癥常見于嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克、重癥感染等應(yīng)激狀態(tài)下，來自于感染部位的LPS大量進(jìn)入體內(nèi)，并引起炎癥介質(zhì)的大量合成、釋放，使包括腎臟在內(nèi)的多器官受累，在急性損傷的發(fā)生、發(fā)展中起著不可忽視的作用。腎臟
2、又是代謝產(chǎn)物及毒素排泄的主要途徑，LPS亦可經(jīng)腎小管重吸收后，使腎小管上皮細(xì)胞處在高濃度LPS微環(huán)境中，可能對腎小管上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要的影響，在AKI的發(fā)生、發(fā)展中起著一定的作用[1]。急性腎損傷所致的急性腎功能衰竭的特征性改變就是腎小球?yàn)V過率下降及腎小管功能障礙，完善的尿液濃縮與鈉離子重吸收的腎小管功能依賴于水通道蛋白的參與及功能性表達(dá)。AQPs（水通道蛋白）分布廣泛，腦、肺、腎等臟器組織均有不同亞型分布，對水和甘油等小分子物質(zhì)代謝有重要的調(diào)節(jié)作用，是保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要物質(zhì)，也受多種因素影響其結(jié)
3、構(gòu)和功能，從而改變對水的通透性，影響器官水和小分子物質(zhì)的代謝，同時(shí)也是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因素。1992年P(guān)reston等發(fā)現(xiàn)腎臟AQP，這一發(fā)現(xiàn)合理地解釋了腎臟自由水代謝的問題。腎臟是水代謝的主要器官，AQPs在腎臟中的研究對揭示腎臟的病理生理改變具有重要作用[2]。近期有報(bào)道藥物、缺血等引起的腎功能衰竭中AQP2表達(dá)明顯下調(diào)，AQP2的這一變化與腎集合管上皮細(xì)胞損傷程度密切相關(guān)，恢復(fù)早于形態(tài)學(xué)改變[3、4]。已證明AQP2是集合管上皮細(xì)胞上最重要，且是惟一受AVP29調(diào)節(jié)的水通道蛋白。分布在細(xì)胞頂質(zhì)膜及細(xì)
4、胞內(nèi)小泡。AVP對AQP2的調(diào)節(jié)有2種方式：（1）短期調(diào)節(jié)作用，AQP2氨基酸序列中從253-256位含蛋白激酶A（PKA）磷酸化部位，AVP與V2R結(jié)合后激活A(yù)C-cAMP-PKA信號傳導(dǎo)途徑，導(dǎo)致AQP2磷酸化，是含AQP2的細(xì)胞內(nèi)小泡向細(xì)胞頂質(zhì)膜轉(zhuǎn)移并與之熔接，從而使細(xì)胞膜對水的滲透性迅速增加，這種調(diào)節(jié)作用可在數(shù)分鐘內(nèi)發(fā)生[5、6]。（2）長期調(diào)節(jié)作用：V2R穩(wěn)定激活可導(dǎo)致AQP2合成增加，AVP是通過V2RcAMP-PKA信號傳遞途經(jīng)致細(xì)胞核內(nèi)cAMP結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子磷酸化及cjun/cFos基因表達(dá)，
5、影響AQP2mRNA轉(zhuǎn)錄及AQP2蛋白合成，從而上調(diào)AQP2的總豐度，因而改變腎臟集合管對水的滲透性，AQP2mRNA的變化可在幾個小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)[7、8、9]。近年研究發(fā)現(xiàn)AQPs可以改善一些病理過程中臟器如肺、腦、腎的水及小分子物質(zhì)的代謝，減少這些相應(yīng)臟器的水腫和損傷，水通道蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞移行對急性腎損傷腎小管功能的恢復(fù)和重建很重要，與預(yù)防和治療這些重要臟器損傷關(guān)系密切[10]，研究其在這些病理過程中功能和結(jié)構(gòu)的變化有助于指導(dǎo)用藥。早期發(fā)現(xiàn)和治療腎功能異常不僅對于糾正休克具有作用，對于內(nèi)臟器官保護(hù)具有更加重
6、要的意義。29水通道蛋白可以受多種因素影響，但是對其有調(diào)節(jié)作用的藥物并不多，其阻斷劑也多為重金屬物質(zhì)，本身就對生物體有損傷，少數(shù)藥物如糖皮質(zhì)激素?fù)?jù)報(bào)道有一定的水通道蛋白調(diào)節(jié)作用。目前研究表明麻醉藥如異氟烷、七氟烷、利多卡因和丙泊酚等對心、腦、肺和腎等臟器的不同損傷具有保護(hù)作用，丙泊酚作為一種靜脈麻醉藥具有鎮(zhèn)靜催眠作用，廣泛應(yīng)用于臨床，有報(bào)道在內(nèi)毒素血癥肺損傷時(shí)丙泊酚可以通過調(diào)節(jié)AQP1起到保護(hù)作用[12]，但對大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷是否通過調(diào)節(jié)AQPs起到保護(hù)作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)并模擬病人內(nèi)毒素血癥
7、觀察所見建立大鼠內(nèi)毒素血癥模型[13、14]，12小時(shí)后行功能檢查并留取腎臟標(biāo)本，病理檢查腎臟損傷情況以及觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)的改變[15]，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)、Western印跡雜交技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)等檢測AQP2基因mRNA和AQP2蛋白、TNF-α、ICAM-1、Bcl2、Bax、Caspase3蛋白等在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過程中表達(dá)的變化，細(xì)胞凋亡程度；同時(shí)觀察在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過程中應(yīng)用公認(rèn)的具有抗炎抗氧化作用的靜脈麻醉藥丙泊酚[16、17]，采用預(yù)處理，同時(shí)給藥和后處理的不同時(shí)間給藥方
8、式，觀察其在大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷過程中對腎臟功能和AQP2基因mRNA、AQP2蛋白、ICAM-1、Bcl2、Bax、Caspase3和細(xì)胞凋亡程度的影響，從分子生物學(xué)角度觀察和探討不同丙泊酚給藥時(shí)間對大鼠內(nèi)毒素血癥腎損傷的作用，為指導(dǎo)臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)包括三部分：1、內(nèi)毒素血癥大鼠腎臟AQP2基因表達(dá)及結(jié)構(gòu)功能變化；2、丙泊酚對大鼠內(nèi)毒素血癥腎組織AQP2基因表達(dá)及結(jié)構(gòu)功能的影響；3、丙泊酚對內(nèi)毒素血
