金銀花葉中木犀草素的分離與鑒定

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1、金銀花葉中木犀草素的分離與鑒定【摘要】目的建立一種可以從金銀花葉中分離出木犀草素的方法。方法采用超聲提取，石油醚回流脫色、大孔樹脂柱和聚酰胺柱分離相結(jié)合的方法，通過薄層色譜、紫外光譜、紅外光譜、高效液相色譜進(jìn)行鑒定，最終得到木犀草素產(chǎn)品。結(jié)果此產(chǎn)品純度最高可達(dá)81.6%，得率為28.9μg·g-1。結(jié)論建立了從金銀花葉中分離木犀草素的新工藝?！娟P(guān)鍵詞】金銀花葉;木犀草素;分離;鑒定　金銀花是名貴中藥材，含有多種有效成分，木犀草素作為一種黃酮單體，具有抗炎、抗菌、抗癌、抑酶、抗氧化、利膽利尿等多種作用，金銀花葉作為金銀花的一種副

2、產(chǎn)物，產(chǎn)量較大，而且常常被浪費(fèi)掉，研究表明，金銀花葉中木犀草素的含量平均是花中的2.8倍[1，2]，但目前對(duì)于金銀花葉中木犀草素的研究僅限于含量測定，對(duì)于木犀草素產(chǎn)品的分離、純化還未見報(bào)道。本文采用超聲提取，石油醚回流脫色、大孔樹脂柱和聚酰胺柱分離相結(jié)合的方法從金銀花葉中分離出了黃酮單體木犀草素，并結(jié)合聚酰胺薄層色譜、紅外光譜、紫外光譜、高效液相色譜等方法對(duì)分離后得到的木犀草素產(chǎn)品進(jìn)行定性鑒定和定量分析，其純度最高可達(dá)81.6%，得率為28.9μg·g-1。　　1儀器與材料　　紫外-可見分光光度計(jì)UV-2450(日本島津公司)

3、;電子分析天平;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52AA(上海亞榮生化儀器廠);Agilent1100型高效液相色譜儀，紅外光譜儀FTIR-8400S(日本島津公司)，紫外燈。聚酰胺粉(80-100目)，木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品(購于北京豐斯特公司)，工業(yè)酒精，其它試劑均為分析純?！　?方法　　2.1木犀草素含量測定精密吸取0.100mg/ml木犀草素對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ml于10ml容量瓶中，用流動(dòng)相(甲醇:0.02%磷酸=50:50)定容至刻度，選擇色譜柱為ZORBAXSB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm，A

4、gilent公司);以甲醇:0.02%磷酸=50∶50為流動(dòng)相;在檢測波長350nm，柱溫30℃;流速為1.0ml/min的條件下進(jìn)樣20.0μl。記錄峰面積，得直線回歸方程為Y=33578.22C-11.807(Y代表峰面積，C代表木犀草素濃度mg/ml)，R2=0.9997;木犀草素在0.02～0.1mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?！　?.2上柱樣品的制備用20倍量的50%乙醇超聲浸提黃酮后，將提取液濃縮，然后按照質(zhì)量比(金銀花葉和聚酰胺粉的質(zhì)量)為15∶1的比例混入聚酰胺(80～100目)粉，使其保持松散，不結(jié)塊，將此

5、固體粉末取出，放在索氏提取器中用石油醚回流脫色10次后，取出此固體粉末，揮干石油醚，即得黃酮粗品拌料，然后經(jīng)過物料比(黃酮粗品拌料與大孔樹脂質(zhì)量比)為1∶6，柱徑與柱長比為1∶6的HPD100型大孔樹脂柱進(jìn)一步分離富集，先用2倍柱體積的蒸餾水洗掉蛋白和糖類等大分子雜質(zhì)，再用70%的乙醇以最大流速洗脫，收集2～8倍柱體積的洗脫液，濃縮后得到樣品?！　?.3聚酰胺柱的裝填把一定量的聚酰胺用水浸泡24h，濕法裝柱，然后用甲醇以3BV/h的流速洗滌聚酰胺，至流出液澄清為至，再用蒸餾水洗至無甲醇。　　2.4木犀草素產(chǎn)品的分離純化樣品上柱

6、后開始洗脫，先用水洗去糖、蛋白分子及其它水溶性雜質(zhì)，然后采用30%，50%，70%的醇溶液梯度洗脫，采用30%和50%的醇梯度洗脫時(shí)，柱中開始有淡粉色和黃色色帶出現(xiàn)，隨著洗脫的進(jìn)行，淡粉色色帶變得模糊，黃色色帶開始緩慢下移。當(dāng)兩個(gè)色帶拉開一段距離后，改用70%的醇洗脫，黃色色帶下移的速度加快，收集此色帶從開始到流完的洗脫液，每50ml一接，記為1～9瓶。　　以醋酸乙酯∶乙酸∶水=1∶1∶1為聚酰胺薄層色譜展開劑，對(duì)1～9瓶的洗脫液初步檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)薄層板上呈現(xiàn)單點(diǎn)，而且此點(diǎn)的Rf值和木犀草素標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的Rf值相同。然后每3瓶一合并，蒸

7、干即可得到3個(gè)不同純度的木犀草素產(chǎn)品，記為1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)。用甲醇對(duì)1號(hào)，2號(hào)，3號(hào)進(jìn)行重結(jié)晶，得到木犀草素產(chǎn)品1，2，3?！　?結(jié)果　　對(duì)1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)木犀草素產(chǎn)品進(jìn)行定性鑒定和定量分析?！　?.1定性分析　　3.1.1顏色反應(yīng)分別取3個(gè)等級(jí)的少量產(chǎn)品溶解在甲醇中，得到的溶液滴于濾紙上，在紫外燈下呈現(xiàn)深紫色，用氨水熏后，在紫外燈下觀察，呈現(xiàn)黃色，這和木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品的斑點(diǎn)顯色一致?！　?.1.2高效液相色譜法的鑒定把上述得到的木犀草素產(chǎn)品用“2.1”項(xiàng)的流動(dòng)相溶解，定容至25ml容量瓶中，對(duì)此溶液在“2.1”項(xiàng)條件下進(jìn)行高效

8、液相色譜分析(以產(chǎn)品2為例進(jìn)行說明)，發(fā)現(xiàn)：①整個(gè)過程中，產(chǎn)品色譜圖呈現(xiàn)單峰，而且此峰的保留時(shí)間和木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間一致，均為Rt=13.1min。②改變流動(dòng)相，產(chǎn)品色譜峰的保留時(shí)間提早或者推后，并沒有發(fā)生拆分;③改變檢測波長為255，267，350nm，產(chǎn)品色譜峰沒有