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《凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導(dǎo)中的褐變控制研究 》由會員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導(dǎo)中的褐變控制研究【摘要】目的研究愈傷組織誘導(dǎo)過程中的褐變問題。方法:將采集的標(biāo)本進(jìn)行外植體滅菌法再接種到培養(yǎng)基,在培養(yǎng)基中加抗褐變劑,進(jìn)行防褐變試驗(yàn)。結(jié)果外植體在4℃冰箱冷藏48h的預(yù)處理對褐變有較好的控制效果。在培養(yǎng)基中加入抗褐變劑比加入吸附劑抗褐變效果好,抗褐變劑中Vc的效果最佳,吸附劑PVP比活性炭好。結(jié)論培養(yǎng)條件,以低溫遮光處理效果較好,光、溫兩個(gè)因素中,凹葉厚樸對光敏感,遮光能有效抑制褐變。液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)抗褐變的效果比單純的固體培養(yǎng)效果好。【關(guān)鍵詞】凹葉厚樸;莖段;愈傷組織;褐變控
2、制;冷藏外植體;抗褐變劑;吸附劑;液體淺層靜置培養(yǎng)〔Abstract〕ObjectiveTostudythebrofragmentsasexplantsduringinducingthecallus.MethodTheexplantediuminediumedium;VitaminCaterialinallanti-broperatureiseffectiveforthetissuecultureconditions,Maganoliabiloba(Rehdetoreeffectiveintheshallofragment;callus
3、;broaterials;adsorbent;shallog/L+6-BA1mg/L+蔗糖30g/L,pH5.8~6.0。每次處理10瓶,每瓶5個(gè)外植體,外植體大小約為0.6cm×0.6cm。1.2方法1.2.1外植體滅菌預(yù)處理后的材料用75%乙醇消毒30s,再用0.1%升汞溶液浸泡10min,無菌水沖洗4次,吸干,在PVP1g/L溶液中切割,接種到培養(yǎng)基上。1.2.2防褐化試驗(yàn)分4個(gè)方面分別進(jìn)行,即:外植體預(yù)處理、培養(yǎng)基中加入防褐變劑或吸附劑、培養(yǎng)條件、固體培養(yǎng)和液體淺層靜置培養(yǎng)后再固體培養(yǎng)。外植體預(yù)處理:用洗衣粉清洗,自來水沖洗1h
4、,瀝干后,保鮮膜密封置于4℃的冷藏箱分別冷藏24、48h,設(shè)對照為不冷藏。培養(yǎng)基中加抗褐變劑和吸附劑試驗(yàn):培養(yǎng)基中加入Vc(10mg/L)、LH(1g/L)、巰基乙醇(1mL/L)、PVP(1g/L)、活性炭(2g/L)。培養(yǎng)條件試驗(yàn):①低溫遮光處理(20℃,遮光20d后,轉(zhuǎn)入25℃及光下,光強(qiáng)1500LX);②遮光處理(25℃,遮光20d,轉(zhuǎn)入25℃及光下,光強(qiáng)1500LX);③對照(25℃,每天光照10h,光強(qiáng)1500LX)。培養(yǎng)基:固體培養(yǎng),在配好的培養(yǎng)基中加入6.5g/L的瓊脂;液體淺層靜置培養(yǎng),不加瓊脂,瓶內(nèi)培養(yǎng)基深度約為0.
5、4cm,培養(yǎng)10d后,轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基中。計(jì)算方法:誘導(dǎo)率=(形成愈傷組織的外植體塊數(shù)/接種的外植體塊數(shù))×100%。褐變率=(褐變的外植體塊數(shù)/接種的外植體塊數(shù))×100%。2結(jié)果2.1外植體預(yù)處理對褐變的影響由表1可看出預(yù)冷處理有降低褐變的效果,使褐變率從對照的45%降低為30%~35%。冷藏時(shí)間48h比24h好。2.2培養(yǎng)基中加抗褐變劑和吸附劑對褐變的影響表2結(jié)果看出,抗褐變劑和吸附劑能很明顯的防止外植體的褐變,而且抗褐變劑的效果比吸附劑好,前者褐變率為10.5%~18%,后者達(dá)到20.5%~25.5%。2.3培養(yǎng)條件對褐變的影響表
6、3實(shí)驗(yàn)中,低溫遮光處理與遮光處理的抑制褐變率相差不大,而兩者與對照比較,都有較大的差異。由表3的結(jié)果看來,在20~25℃之間,凹葉厚樸莖段愈傷組織的誘導(dǎo)對溫度要求不嚴(yán)格,而對光敏感。2.4固體培養(yǎng)基和液體淺層靜置培養(yǎng)由表4的結(jié)果來看,液體淺層靜置培養(yǎng)一段時(shí)間后再轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基中比單純固體培養(yǎng)基中的效果要好。3結(jié)論本文從4個(gè)方面考察了不同處理對凹葉厚樸莖段誘導(dǎo)愈傷組織中褐變的影響:(1)外植體在4℃冰箱冷藏48h的預(yù)處理對褐變有較好的控制效果,這可能與低溫狀態(tài)下,細(xì)胞內(nèi)多酚氧化酶活性降低以及酚類化合物合成減少有關(guān)。(2)在培養(yǎng)基中加入抗褐
7、變劑和吸附劑,抗褐變劑的效果比吸附劑好,抗褐變劑中Vc的效果最佳,其作用機(jī)制主要是通過將多酚氧化酶(PPO)作用下形成的醌類物質(zhì)重新還原為酚而減輕褐變[2]61-62,這與前人的試驗(yàn)結(jié)果一致[3]。PVP是酚類物質(zhì)的專一性吸附劑,在生化制備中常用作酚類物質(zhì)和細(xì)胞器的保護(hù)劑[4]16-17,防止褐變的效果比無機(jī)吸附劑活性炭好。(3)培養(yǎng)條件以低溫遮光處理效果較好,光溫兩個(gè)因素中,凹葉厚樸對光敏感,遮光能有效抑制褐變,這可能是在黑暗條件下,阻斷了酚類物質(zhì)的生化合成途徑,降低了酚類化合物的含量,同時(shí)抑制了PPO活性,減輕了酚類物質(zhì)的氧化有關(guān)[
8、4]18,光照會提高PPO的活性,促進(jìn)酚類物質(zhì)的氧化。溫度對褐變造成的影響有兩個(gè)方面的原因:較低的溫度有利于傷口的愈合;另外,會降低PPO的生物活性,從而減輕褐變[2]63。(4)液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉(zhuǎn)