p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究

p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究

ID:26913221

大?。?.41 MB

頁數(shù):60頁

時間:2018-11-30

p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究_第1頁
p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究_第2頁
p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究_第3頁
p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究_第4頁
p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究_第5頁
資源描述:

《p33ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、·原創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了論文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名:日期:年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文,允許學(xué)位論文被查閱和借閱;學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文;學(xué)

2、??筛鶕?jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。作者簽名:導(dǎo)師簽名:日期:年月日····目錄一、中文摘要……………………………………………………1二、英文摘要……………………………………………………3三、論文正文前言…………………………………………………………6技術(shù)路線……………………………………………………8材料與方法…………………………………………………9實驗結(jié)果……………………………………………………20討論…………………………………………………………31結(jié)論…………………………………………………………35參考文獻…………

3、……………………………………………36四、主要英文縮略語索引………………………………………42五、綜述……………………………………………………………43六、附錄…………………………………………………………50七、致謝……………………………………………………………51····課題資助項目自然科學(xué)基金課題基金項目(課題編號:No.03JJY3029)湖南省教育廳課題基金項目(課題編號:No.01B016)湖南省衛(wèi)生廳課題基金項目(課題編號:No.Y02-069)湖南省科技廳課題基金項目(課題編號:02SSY4004)····p33

4、ING1b基因轉(zhuǎn)入對SW480細胞生長增殖影響的研究研究生:趙帥導(dǎo)師:賀修勝中文摘要[目的]p33ING1b基因是一個新近克隆的腫瘤抑制基因,在人類多種腫瘤中存在該基因結(jié)構(gòu)與表達的異常。本研究選取p33ING1b基因低表達的人結(jié)腸癌SW480細胞系做為研究對象,將外源性p33ING1b基因轉(zhuǎn)染入SW480細胞系,研究p33ING1b基因高表達對SW480細胞系生長增殖的影響,并探討其作用的可能分子機制。[方法]將pcDNA3.1(+)/p33ING1b真核表達載體,采用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù),轉(zhuǎn)染人結(jié)腸癌SW480細胞系,G41

5、8篩選,挑選陽性克隆,經(jīng)RT-PCR、Westernblot和免疫細胞化學(xué)鑒定陽性克隆,擴大培養(yǎng)陽性克隆細胞,通過生長曲線繪制和軟瓊脂集落形成實驗,檢測pcDNA3.1(+)/p33ING1b/SW480、pcDNA3.1(+)/SW480以及SW480三組細胞的增殖速度,用流式細胞儀分析三組細胞的細胞周期改變和凋亡率,闡明p33ING1b基因高表達對SW480細胞系的影響。并用Westernblot方法,檢測三組細胞p53、p21WAF1、Bax及Bcl-2蛋白的表達情況,探討p33ING1b基因抑瘤的可能分子機制。[結(jié)果]

6、重組質(zhì)粒DNA經(jīng)酶切和測序鑒定,結(jié)果均證實pcDNA3.1(+)/p33ING1b真核表達載體構(gòu)建成功。采用陽離子脂質(zhì)體將pcDNA3.1(+)/p33ING1b和pcDNA3.1(+)轉(zhuǎn)入SW480細胞,G418篩選的陽性克隆細胞,經(jīng)RT-PCR、SP免疫細胞化學(xué)及Westernblot方法檢測,鑒定結(jié)果顯示,高表達p33ING1b蛋白質(zhì)的SW480細胞系成功建立。細胞生長曲線結(jié)果表明,在SW480細胞中高表達p33ING1b蛋白的轉(zhuǎn)染組,與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)空載體組相比,細胞生長增殖速度減慢(P<0.05);軟瓊脂克隆形成實驗結(jié)

7、果顯示,pcDNA3.1(+)/p33ING1b/SW480細胞形成的集落率為(9.8±2.1)%,而pcDNA3.1(+)/SW480細胞和SW480細胞的集落形成率分別為(21±3.1)%和(23±2.6)%,轉(zhuǎn)基因組細胞集落形成率明顯低于轉(zhuǎn)空載體組和未轉(zhuǎn)染組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。進一步采用流式細胞儀檢測p33ING1b基因?qū)W480細胞周期及凋亡的1····影響,研究結(jié)果顯示:pcDNA3.1(+)/p33ING1b/SW480組細胞凋亡率為15.4±1.7%,而SW480細胞和pcDNA3.1(+)/S

8、W480細胞的凋亡率,分別為1.6±0.8%和2.0±0.6%,轉(zhuǎn)基因組細胞凋亡率高于轉(zhuǎn)空白載體組和未轉(zhuǎn)染組,差異具有顯著性意義(P<0.05),而對細胞周期的改變不明顯(P>0.05)。結(jié)果提示,p33ING1b基因在SW480細胞中高表達,能有效抑制SW480細胞的生長,

當前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當前文檔最多預(yù)覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學(xué)公式或PPT動畫的文件,查看預(yù)覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權(quán)歸屬用戶,天天文庫負責(zé)整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權(quán)有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細閱讀文檔內(nèi)容,確認文檔內(nèi)容符合您的需求后進行下載,若出現(xiàn)內(nèi)容與標題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網(wǎng)絡(luò)波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。