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《骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠牙髓干細(xì)胞增殖和成骨分化的作用分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠牙髓干細(xì)胞增殖和成骨分化的作用研究中文摘要目的：探討骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠牙髓干細(xì)胞（DPSCs）增殖和成骨分化的影響，并對(duì)PI3K/Akt通路在其中的作用進(jìn)行初步研究。方法：1、分離培養(yǎng)大鼠DPSCs并進(jìn)行鑒定：采用組織塊消化法分離獲得大鼠牙髓細(xì)胞，克隆化分離培養(yǎng)大鼠DPSCs，并采用免疫組織化學(xué)方法鑒定其細(xì)胞表型。2、檢測骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠DPSCs增殖和成骨分化的作用：實(shí)驗(yàn)組用骨碎補(bǔ)總黃酮濃度分別為0.01g/L、0.05g/L和0.1g/L的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)照組不加入骨碎補(bǔ)總黃酮，僅以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基為細(xì)胞培
2、養(yǎng)體系。分別在誘導(dǎo)培養(yǎng)后第3、5、7和第9天用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖；培養(yǎng)后第9天檢測各組細(xì)胞堿性磷酸酶（ALP）水平；第21天茜素紅染色法檢測鈣結(jié)節(jié)形成情況。3、檢測PI3K/Akt通路在骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠DPSCs增殖及成骨分化作用過程中的活化情況：誘導(dǎo)培養(yǎng)后第9天采用WesternBlot法檢測以上各組細(xì)胞pAkt的表達(dá)。結(jié)果：1、分離出的大鼠牙髓細(xì)胞體外生長良好，形態(tài)多為成纖維細(xì)胞樣，少量細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則；克隆化分離培養(yǎng)出的DPSCs增殖較快，呈集落樣生長，細(xì)胞排列緊密，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，細(xì)胞形態(tài)逐漸伸展為長梭型；免疫組化結(jié)果顯示大鼠DPSCs陽性表
3、達(dá)CD44及CD29，而CD34呈陰性表達(dá)。2、經(jīng)骨碎補(bǔ)總黃酮濃度分別為0.01g/L、0.05g/L及0.1g/L的誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用后，從時(shí)間上看，在各檢測時(shí)間點(diǎn)，各實(shí)驗(yàn)組OD490與對(duì)照組相比均增加（P<0.05），且0.5g/L組較0.01g/L組的OD490也增加（P<0.05），但0.1g/L組較0.05g/L組OD490增加沒有顯著性差異（P﹥0.05）；從濃度上看，各實(shí)驗(yàn)組第5、7、9天較第3天的OD490均增加（P<0.05），且各實(shí)驗(yàn)組OD490時(shí)間依賴性增加也有顯著性（P<0.05）。各實(shí)2華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文驗(yàn)組細(xì)胞ALP活性均高于對(duì)照組
4、（P<0.05），且在骨碎補(bǔ)總黃酮濃度為0.01g/L、0.05g/L及0.1g/L時(shí)的OD410濃度依賴性增高也有顯著性（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組鈣化能力較對(duì)照組增強(qiáng)（P<0.05），且有濃度依賴性（P<0.05）。3、pAkt的蛋白相對(duì)表達(dá)量隨骨碎補(bǔ)總黃酮濃度的增加而升高（P<0.05）。結(jié)論：骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)大鼠DPSCs增殖及成骨分化具有促進(jìn)作用，表現(xiàn)出濃度和時(shí)間依賴性，且該作用可能是依賴PI3K/Akt通路所介導(dǎo)的。關(guān)鍵詞：牙髓干細(xì)胞；骨碎補(bǔ)總黃酮；PI3K/Akt通路；增殖；成骨分化3華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文Effectsoftotalflavonoid
5、sofdrynariaonproliferationandosteogenicdifferentiationofratdentalpulpstemcellsAbstractObjectives：Toexploretheeffectsoftotalflavonoidsofdrynariaonproliferationandosteogenicdifferentiationofratdentalpulpstemcells(DPSCs),andtoevaluatethepotentialroleofPI3K/Aktpathwayintheaforementionede
6、ffects.Methods：1.Dentalpulpcellswereculturedbyexplantscombinedwithenzymedigestiontechnique.SinglecelllineofDPSCwasisolatedbylimiteddilutionofculturedcellsandidentifiedbyimmunohistochemistry.2.DPSCswereculturedinosteoconductiveculturedmediawithdifferentconcentrationsoftotalflavonoidso
7、fdrynaria(0.01g/L,0.05g/Land0.1g/L).Cellsincontrolgroupwereculturedwithouttotalflavonoidsofdrynaria.Cellproliferationofeachgroupwasassayedat3th,5th,7thand9thdaybyMTT.TheALPactivitiesweretestedafter9days,andformingofcalcifiednodulesofeachgroupwastestedafter3weeks.3.TheexpressionofpAkt
8、ineachgroupw
