雙酚a致雄性小鼠生殖毒性的研究

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1、雙酚A致雄性小鼠生殖毒性的研宄長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院湖南長(zhǎng)沙410219【摘要】目的：探討不同劑量雙酚A(bisPhendA,BPA＞對(duì)雄性小鼠的生殖毒性的影響。方法：選取健康雄性小鼠，采用灌胃染毒，染毒4周后頸椎脫臼處死，觀察精子形態(tài)，精子畸形率，精子活度，睪丸切片。結(jié)果：雙酚A實(shí)驗(yàn)組，其中附睪臟器系數(shù)，精子畸形率，精子活度指標(biāo)隨著劑量的升高而呈正相關(guān)，具有一定的對(duì)比性。HE染色得山結(jié)果顯示雙酚A實(shí)驗(yàn)組小鼠附睪有損傷，生精小管山現(xiàn)壞死。結(jié)論：一定劑量的雙酚A對(duì)雄性小鼠精子有生殖毒性?！娟P(guān)鍵詞】BPA;生殖毒性；雄性小鼠【中圖分類號(hào)】R114【

2、文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2096-0867(2016)-2-067-02雙酚A(bisphendA,BPA｝是一種酚類有機(jī)物,水中溶解度為120-300mg/L,具有難揮發(fā)性和疏水性，易溶于醇和酮。H常生活中人們可以通過(guò)飲食攝入、灰塵吸入和皮膚接觸BPA［l-2］。在人的血液、尿液、胎盤、乳汁、羊水及其他體液等組織中能檢測(cè)到BPA［3］。BPA是一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物［4］,能夠模擬雌激素的作用，與雌激素受體結(jié)合，干擾體內(nèi)天然激素的正?；顒?dòng)，即使是極低劑量也能對(duì)生物體的生殖、神經(jīng)、免疫等功能產(chǎn)生影響［5-6］。木實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)研究BP

3、A對(duì)雄性小鼠的牛.殖毒性，試分析BPA致雄性小鼠生殖毒性的量-效關(guān)系，探討B(tài)PA致雄性小鼠生殖毒性可能的作用機(jī)制。1材料與方法1.1儀器與設(shè)備BPA,分析純，中國(guó)上?；ぴ噭┕?，生產(chǎn)編號(hào)B108652;玉米油，藥用級(jí)，中國(guó)上?；ぴ噭┕?，生產(chǎn)編號(hào)C116025;顯微鏡(Unican)HV2818,生產(chǎn)編號(hào)30108453；電子分析天平(梅特勒一托利多儀器上海有限公司)。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用湖南省疾控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的普通級(jí)封閉群，KM群雄性小鼠,體重18g到22g，隨機(jī)分成對(duì)照組，BPA低劑量組、BPA高劑量組。分別記為C組，B低

4、劑量組、B高劑量組，每組3只動(dòng)物，對(duì)照組采用玉米油做空白對(duì)照，BAF低組染毒劑量為50mg/kgBW,BAF高組劑量為200mg/kgBW。1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1形態(tài)學(xué)觀察計(jì)算精子活動(dòng)率、精子畸形率。精子活動(dòng)率：采用伊紅染色法，將0.5g伊紅丫染料溶于lOOmL等滲鹽水中配成染色液。計(jì)數(shù)100條精子，計(jì)數(shù)的精子所占比例即為精子活動(dòng)率。精子活動(dòng)率=活精子數(shù)/100精子畸形率：取一側(cè)附睪置于5mL生理鹽水中，剪碎，37°C孵育15-20min后，制得精子懸液。每只動(dòng)物檢查1000只精子，計(jì)算精子畸形率。畸形率=畸形精子數(shù)/10001.

5、3.2臟器系數(shù)迅速取出實(shí)驗(yàn)小鼠睪丸和附睪，去除周圍的脂肪組織和結(jié)締組織，準(zhǔn)確稱量小鼠雙側(cè)睪丸和附睪的重量。臟器系數(shù)(％)=臟器體重(g)/小鼠體重(g)×100%1.3.3形態(tài)學(xué)觀察常規(guī)HE染色，石蠟切片，光學(xué)顯微鏡觀察。以上睪丸病理學(xué)染色、切片、拍照和讀片將在長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室老師指導(dǎo)下完成。1.4統(tǒng)計(jì)方法所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件錄入分析，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組數(shù)據(jù)采用方差分析和LSD法進(jìn)行比較。2結(jié)果2.1一般情況染毒后，低劑量小組實(shí)驗(yàn)小鼠體重奮上升，高劑量組小鼠出現(xiàn)活動(dòng)量減少，精神蔞靡，進(jìn)食量也有不同

6、程度減少，停止染毒后逐漸好轉(zhuǎn)；整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中高劑量組小鼠死亡1只。2.1BPA染毒對(duì)成年雄性小鼠精子畸形率，精子活度的影響B(tài)PA染毒各組小鼠的精子活動(dòng)率與對(duì)照組比較奮顯著性差異(P<0.05),精子畸形率與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05＞，附睪的臟器系數(shù)與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)果見(jiàn)下表。表BAF染毒對(duì)精子活動(dòng)率，精子畸形率，睪丸附睪臟器系數(shù)的影響(±s)2.2BPA對(duì)成年雄性小鼠睪丸組織的影響通過(guò)石蠟切片結(jié)果顯示：C組結(jié)構(gòu)清晰的呈圓形或橢圓形的生精管，管壁內(nèi)有不同發(fā)育階段的生

7、精細(xì)胞，以及多數(shù)成熟精子，與生精細(xì)胞緊密相貼。睪丸及間質(zhì)無(wú)胞壁脫落、壞死、鈣化或精子肉芽腫，為正常辜丸組織結(jié)構(gòu)。B低劑量組小鼠，主要改變冇生精細(xì)胞脫離基底部向管腔部移動(dòng)，成熟精子減少，少數(shù)曲細(xì)精管上皮細(xì)胞排列紊亂，少數(shù)上皮與基底部分離。B高劑量組改變可見(jiàn)曲細(xì)精管上皮細(xì)胞排列紊亂，少數(shù)上皮與基底部分離管腔內(nèi)可見(jiàn)脫落的生精細(xì)胞。部分生精管內(nèi)已經(jīng)完全變性壞死，一些支持細(xì)胞與生精細(xì)胞呈分離狀，生精細(xì)胞減少較明顯。綜上所述隨著B(niǎo)PA染毒劑量的增高，生精小管胞壁以及生精小管損傷加深，甚至出現(xiàn)生精小管變性壞死現(xiàn)象。BPA通過(guò)對(duì)成熟小鼠睪丸精子數(shù)0

8、，精子密度，睪丸以及附睪的臟器系數(shù)，精子活動(dòng)率，以及精子畸形對(duì)成熟雄性小鼠的生精能力造成不同程度的影響，對(duì)生殖系統(tǒng)有一定毒性，見(jiàn)圖1-3。3討論本次研宄發(fā)現(xiàn)BPA對(duì)雄性小鼠生殖系統(tǒng)奮一定毒性。與對(duì)照組比較，BPA染毒組小鼠睪丸及附睪臟