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1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文胸腺素β4在Tenon囊成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及CTGF對其表達(dá)的影響華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院眼科碩士研究生：穆歌導(dǎo)師：曹陽副教授摘要目的：胸腺素β4（thymosinβ4Tβ4）是一種重要的G-肌動(dòng)蛋白偶聯(lián)蛋白,參與調(diào)控不同組織的炎癥反應(yīng)和創(chuàng)傷愈合，本實(shí)驗(yàn)的目的是從分子生物化學(xué)水平檢測人Tenon囊成纖維細(xì)胞(humanTenon’scapsulefibroblasts,HTFs)中Tβ4的表達(dá)，并研究結(jié)締組織生長因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)對其表達(dá)的影響。方法：體外培養(yǎng)原代HTFs，傳代后取3~4代細(xì)胞進(jìn)行
2、實(shí)驗(yàn)。一步法提取HTFsRNA，應(yīng)用RT-PCR檢測Tβ4mRNA的表達(dá)，并用免疫組化法檢測細(xì)胞中Tβ4蛋白的表達(dá)。選用終濃度為0ng/ml（對照組）、1.0、10.0及100.0ng/mlCTGF處理上述細(xì)胞24小時(shí)，半定量RT-PCR反應(yīng)觀察CTGF對體外培養(yǎng)HTFsTβ4mRNA表達(dá)的影響，以β-actin作為內(nèi)參照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：RT-PCR擴(kuò)增得到單一產(chǎn)物，免疫組化結(jié)果顯示Tβ4在體外培養(yǎng)的HTFs胞漿中表達(dá)陽性，胞核中表達(dá)陰性。半定量RT-PCR檢測結(jié)果經(jīng)圖像分析得到，1.0、10.0及100.0ng/mlCTGF處理組的Tβ4/β-actin的吸光度比值分別為1.11±0.0
3、4，1.05±0.03，0.82±0.06，與對照組比值1.23±0.02比較差異有顯著意義（P<0.05）。Tβ4/β-actin隨著CTGF的濃度增大而降低，呈劑量依賴性。結(jié)論：體外培養(yǎng)的HTFsTβ4表達(dá)陽性。CTGF抑制HTFs中Tβ4的表達(dá)，這可能是青光眼濾過術(shù)后濾過泡瘢痕化發(fā)生的機(jī)制之一。關(guān)鍵詞：胸腺素β4；CTGF；人Tenon囊成纖維細(xì)胞；濾過泡瘢痕化；青光眼1華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文ExpressionofThymosinbeta4inHumanTenon’sCapsuleFibroblastsandtheEffectofCTGFonitsExpressionCand
4、idate:MuGeSupervisors:Prof.CaoYangDepartmentofOphthalmology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyAbstractPurpose:Thymosinbeta4(Tβ4)isamainactin-sequestratingpeptidethatmodulatesinflammationandhealingindifferenttissues.Thepurposeofthisstudywastoinvestigatethe
5、molecularandbiochemicalexpressionofTβ4inhumanTenon’scapsulefibroblasts(HTFs)andtoinvestigatetheeffectofconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)ontheexpressionofTβ4.Methods:TotalRNAfromcultured3-4passageHTFsinvitrowasextractedwithTRIZOLreagent.Tβ4messengerRNAwasmeasuredbyreversetranscriptase-polymerase
6、chainreaction(RT-PCR).AnimmunohistochemicalstainwasusedtodetectTβ4protein.Aftertreatedwith0ng/ml（control）,1.0,10.0and1.0ng/mlCTGFfor24h，Tβ4expressionincultured3-4passagehumanTenon’scapsulefibroblastswasmeasuredbysemi-quantitativeRT-PCR.Results:AsingleRT-PCRamplifiedproductwasobtained.Tβ4immunohi
7、stochemicalstainingwaspositiveincytoplasmofHTFs,whilenegativeinnucleus.Theresultofthesemi-quantitativeRT-PCRwasanalyzedbyimageanalysis.Respectively,treatedwith1.0,10.0and100.0ng/mlCTGF,thevaluesofTβ4/β-actinwere1.11±0.04，1.0
