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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號(hào)墼蘭晝：lUDC610博士學(xué)位論文Ezrin蛋白在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及黃芩素對(duì)其表達(dá)的影響RoleofEzrinProteinintheInvasionandMetastasisofOsteosarcomaandEffectofBaicaleinonitsExpression作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：張健臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)湘雅三醫(yī)院張朝躍論文答辯日期檻皇二17答辯委員會(huì)中南大學(xué)2014年5月萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工
2、作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。作者簽名：縫也日期：巡年二厶二§學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者和指導(dǎo)教師完全了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：即學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版；本人允許本學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢詫?/p>
3、本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密論文待解密后適應(yīng)本聲明。作者簽名：墨莖壘簍日期：赳年三月!日導(dǎo)師簽名越日期：巡年白生日萬方數(shù)據(jù)摘要第一部分Ezrin蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其意義目的：探討Ezrin蛋白在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系。方法：1．收集126例骨肉瘤組織石蠟標(biāo)本及27例骨軟骨瘤組織石蠟標(biāo)本，通過免疫組化染色檢測(cè)標(biāo)本中Ezrin蛋白表達(dá)情況；2．分析骨肉瘤組織中Ezrin蛋白表達(dá)與患者性別、年齡以及腫瘤直徑、病理分型、E
4、nnecking分期、位置、肺部轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：1．骨肉瘤組織中Ezrin蛋白陽性率(81．74％)明顯高于骨軟骨瘤組織(29．63％)，差異有顯著性(Z=35．63，P<0．01)；2．伴有肺部轉(zhuǎn)移的骨肉瘤組織中Ezrin蛋白陽性率(97．78％)較無肺部轉(zhuǎn)移者(72．84％)增加，差異有顯著性(礦=15．68，P<0．05)，低分化骨肉瘤組織中Ezrin蛋白陽性率(94．87％)也高于中+高分化者(75．86％)(Z2=12．32，P<0．05)，但是在不同性別、年齡、腫瘤直徑、Ennecking分期及
5、部位的骨肉瘤組織中Ezrin蛋白陽性率并無顯著性差異(均19>0．05)。結(jié)論：Ezrin蛋白在骨肉瘤組織中明顯升高，且與腫瘤肺轉(zhuǎn)移及惡性程度相關(guān)。圖8幅，表2個(gè)，參考文獻(xiàn)23篇。關(guān)鍵詞：骨肉瘤；Ezrin蛋白；免疫組化分類號(hào)：R738．1II萬方數(shù)據(jù)第二部分EzrinsiRNA對(duì)MG．63細(xì)胞生物學(xué)行為的影響摘要目的：應(yīng)用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)特異性下調(diào)Ezrin蛋白在骨肉瘤MG．63細(xì)胞中的表達(dá)，探討Ezrin蛋白在骨肉瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用。方法：1．設(shè)計(jì)3對(duì)EzrinsiRNA(EzrinsiRNAl、Ezr
6、insiRNA2、EzrinsiRNA3)，轉(zhuǎn)染MG．63細(xì)胞，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR、Westernblotting檢測(cè)細(xì)胞EzrinmRNA和蛋白表達(dá)水平，篩選出1對(duì)干預(yù)效果最好的EzrinsiRNA。2．將干預(yù)效果最好的Ezrinsi砌臨、ScramblesiRNA分別轉(zhuǎn)染MG一63細(xì)胞，并設(shè)立1組未轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖；3．通過Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移、侵襲能力，細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞的黏附能力4．利用Westernblotting檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶．2(MMP．2)、基質(zhì)
7、金屬蛋白酶．9(MMP．9)、E一鈣粘蛋白、N一鈣粘蛋白、波形蛋白、Src、磷酸化Src(p．Src)、Akt、磷酸化Akt(p．Akt)表達(dá)；5．30只裸鼠隨機(jī)分成3組：空白對(duì)照組(n=10)、ScramblesiRNA組(n=10)和EzrinsiRNA組(n=10)，分別通過鼠尾靜脈注射未轉(zhuǎn)染siRNA、轉(zhuǎn)染ScramblesiRNA及EzrinsiRNA的MG一63細(xì)胞，第42天處死裸鼠，比較實(shí)驗(yàn)前后體重及肺表面結(jié)節(jié)個(gè)數(shù)。結(jié)果：1．EzrinsiRNA3對(duì)EzrinmRNA和蛋白表達(dá)的抑制作用優(yōu)于EzrinsiRN
8、Al、EzrinsiRNA2(P
