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《外周血內(nèi)皮祖細胞改善肢體缺血的研究論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、外周血內(nèi)皮祖細胞改善肢體缺血的研究論文王輝，王嶺，李開宗，凌瑞，孫寶華，李曉軍，易軍【關(guān)鍵詞】內(nèi)皮；干細胞；移植；外周血【Abstract】AIM:Toestimatetheeffectofhumanperipheralbloodderivedendothelialprogenitorcell(EPC)transplantationontherepairmentoflimbischemia.METHODS:Themononuclearcellsfromhumanperipheralbloodediumsupplemented,
2、20ng/mLVEGFand4ng/mLbFGFinvitro.ThespecificmarkersofEPCoralartery,greatsaphenousartery,iliaccircumflexartery,andmuscularbranchof15Balb/cnudemicebischemia.The6dayadherencecellsmarkedbyCMDiIultipointinjectedintotheleftlocalmusclesofischemiclimbs(EPCgroup)andM199ultipo
3、intinjectedintotherightlocalmusclesofischemiclimbs(M199group)inordertoevaluatethetherapeuticeffect.Sevendaysafteroperation,60μgFITCUEAicebgastroemiusinedicroscopy.ThenumberofcapillariesofischemiclimbseasuredbyfactorⅧrelatedantigenimmunohistochemicalstaining.RESULTS:
4、Theculturedcellsatday6expressedKDR,CD133,CD34andv199group(P0.05).RedandgreenfluorescenceiclimbsofnudemiceintheEPCgroup.CONCLUSION:199培養(yǎng)液重懸，以2×108/L的密度接種于一次性培養(yǎng)瓶中.每3d換液，用Hanks液洗掉未貼壁的細胞后加入M199培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng).在培養(yǎng)的第6日和第14日分別對細胞計數(shù)，并制作流式細胞儀檢測標(biāo)本，共12份，分別做KDR,CD133,CD34和vDiI濃度為2mg/L，
5、在37℃孵育5min，4℃15min,PBS洗2次后，2.5g/L胰酶/EDTA消化，離心后重懸于M199培養(yǎng)液中.后肢缺血裸鼠共15只，左后肢局部多點注射擴增后的貼壁細胞，共5mL，細胞總量5×105，為EPC治療組；右后肢局部多點注射M199培養(yǎng)液，共5mL，為M199對照組.移植標(biāo)記細胞后的第8日,脫臼處死裸鼠.處死前1h，從尾靜脈注入20mg/LFITC標(biāo)記的的荊豆凝集素3mL.取心、肝、肺、脾、腎及雙后肢小腿肌肉40g/L甲醛固定后作石蠟切片，脫蠟后熒光顯微鏡下觀察.1.2.4裸鼠后肢情況的檢測手術(shù)后每日觀察裸鼠后肢
6、色澤、溫度的變化和活動情況.雙后肢小腿肌肉石蠟切片做vDiI)和黃綠色(代表FITCUEA)雙色熒光的細胞摻入(圖2)，說明移植的EPC定向整合到了缺血局部.其他臟器以及M199對照組后肢，則未見雙色熒光.圖2EPC組后肢肌肉中可見紅色和黃綠色雙色熒光2.3肢體缺血情況的檢測EPC組缺血后肢肌肉中的毛細血管密度高于M199組［（6.8±1.5）vs（3.8±1.6),P0.05］,說明EPC組的血管重建過程增強，EPC的移植極大地改善了缺血肢體的恢復(fù).M199對照組中僅有2條后肢未出現(xiàn)明顯壞死，3條后肢趾端壞死，10只出現(xiàn)小腿
7、的自動脫落；而在EPC組,有10條后肢未見明顯壞死，4條后肢有趾端壞死，僅1條后肢出現(xiàn)肢體脫落.資料統(tǒng)計中趾端壞死和肢體脫落均視為無效，兩組間有效率比較［(13.33%)vs(66.67%)］差異有顯著意義(P0.01).3討論近年來，出生后血液循環(huán)中存在能分化為內(nèi)皮細胞的EPC的概念逐漸得到關(guān)注，這種具有高增殖潛能的細胞以出生后血管生成的方式參與缺血局部的血管重建過程［8-9］.目前關(guān)于EPC的研究取得了很大的進展，但是仍有許多不清楚的地方.EPC和單個核細胞在發(fā)育上有何關(guān)系？如何確定EPC在循環(huán)中的量及其富集、分離方法?E
8、PC在體外不同細胞因子調(diào)控下具有可塑性的誘導(dǎo)分化機制如何？如何近一步明確EPC的增殖潛能，并尋求最佳擴增體系以提供足量的有活力的細胞源，以便更好地應(yīng)用？這些都是值得研究的問題.我們研究了人外周血單個核細胞分化為EPC并應(yīng)用于缺血性疾病治療的可行性.在我們的培養(yǎng)體系中,人外周血
