資源描述：
《dnm3對肝癌細(xì)胞生長的抑制作用及其機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、論文題目DNM3對肝癌細(xì)胞生長的抑制作用及其機(jī)制研究TheInhibitionandtheMechanismsofDNM3onHepatocellularCarcinomaCells 目錄目錄4屮文摘要5Abstract8第1章前言12第2章材料與方法162.1主要儀器及設(shè)備162.2試劑，細(xì)胞株和培養(yǎng)條件162.3細(xì)胞活性檢測182.4細(xì)胞周期分析182.5AnnexinV–PI法細(xì)胞凋亡檢測192.6shRNA轉(zhuǎn)染192.7DNM3表達(dá)2()2.8總RNA提取和實吋定量PCR(qRT-PCR)212.9West
2、ernblotting檢測DNM3蛋白表達(dá)情況212.10NO產(chǎn)物測定212.11細(xì)胞內(nèi)ROS水平的測定222.12病例及標(biāo)本222.13實驗動物及腫瘤模型構(gòu)建222.14免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)染色232.15統(tǒng)計分析25第3章結(jié)果263.1DNM3對肝癌生長的抑制作用263.1.1人類肝癌樣本和肝癌細(xì)胞的DNM3表達(dá)下調(diào)263.1.2抑制DNM3促進(jìn)SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖283.1.3DNM3過表達(dá)可誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡增加并抑制腫瘤生長303.2DNM3對NOS的激活作用及
3、DNM3與NO下游通路的關(guān)系323.2.1DNM3過表達(dá)使SMMC-7721細(xì)胞線粒體功能受損，細(xì)胞內(nèi)ROS蓄積323.2.2DNM3過表達(dá)使SMMC-7721細(xì)胞內(nèi)iNOS和NO的生成增加323.2.3抑制iNOS可以減弱DNM3上調(diào)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡34第4章討論35第5章結(jié)論38參考文獻(xiàn)39綜述：早期診斷肝細(xì)胞癌的腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展44參考文獻(xiàn)47附錄51致謝52 中文摘要目的：觀察DNM3在肝癌組織及肝癌細(xì)胞屮的表達(dá)情況及過表達(dá)對肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響,并試圖揭示其可能涉及的作用機(jī)制，旨在為進(jìn)一步研究探討治療HCC的新技
4、術(shù)提供參考思路。方法與結(jié)果：收集我院10例肝癌患者肝癌腫瘤組織及其癌旁組織，并用SMMC7721肝癌細(xì)胞株構(gòu)建裸鼠皮下腫瘤模型。分別在細(xì)胞水平及動物實驗進(jìn)行研宄，結(jié)果如下：1.實時定量PCR技術(shù)比較了10例HCC患者的肝癌組織及其癌旁組織屮DNM3mRNA的含量，結(jié)果顯示肝癌組織中的DNM3mRNA水平低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；采川Westernblotting技術(shù)進(jìn)一步檢測肝癌組織和癌旁組織巾的DNM3蛋白表達(dá)情況,結(jié)果S示肝癌腫瘤組織中DNM3蛋白的表達(dá)量普遍少于癌旁組織；在離體細(xì)胞實驗中，正常人類肝細(xì)胞株LO
5、2的DNM3mRNA相對水平明顯高于肝癌細(xì)胞株HepG2、Hep3B,BEL-7402和Huh7細(xì)胞株屮DNM3mRNA的相對水平；采用Westernblotting技術(shù)進(jìn)一步檢測細(xì)胞中的DNM3蛋白表達(dá)情況，其變化趨勢與DNM3mRNA的趨勢相-?致。結(jié)果提示肝癌細(xì)胞中的DNM3表達(dá)水平低于正常的肝細(xì)胞，在人肝細(xì)胞癌巾DNM3是下調(diào)的。2.為了探討DNM3下調(diào)對肝細(xì)胞癌細(xì)胞的作用，我們用DNM3shRNA阻斷DNM3在SMMC-7721細(xì)胞屮的表達(dá)。經(jīng)實時定:W:PCR和Westernblotting結(jié)果顯示DNM3shRNA在mRN
6、A水平和蛋白水平均顯著下調(diào)了DNM3的表達(dá)。采用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了DNM3shRNA的細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)。為了進(jìn)一步探討DNM3表達(dá)下調(diào)促進(jìn)肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖的可能機(jī)制，我們采川流式細(xì)胞儀分析SMMC-7721細(xì)胞的細(xì)胞周期分布情況，結(jié)果S示轉(zhuǎn)染了DNM3shRNA的SMMC-7721細(xì)胞在G0/G1期的百分比顯著下降，在G2/M期的百分比顯著升高，結(jié)果提示DNM3表達(dá)下調(diào)后，細(xì)胞分裂活動增強(qiáng)。進(jìn)一步檢測了細(xì)胞周期相關(guān)的調(diào)節(jié)分子的蛋白質(zhì)水平，結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染了DNM3shRNA的SMMC-7721細(xì)胞中，cycli
7、nDI、CDK2、CDK4水平均顯著升高。這些結(jié)果表明，DNM3表達(dá)下調(diào)可能通過促進(jìn)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的分泌，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的細(xì)胞增殖活動。簡而言之，抑制DNM3的表達(dá)，可促進(jìn)SMMC-7721肝癌細(xì)胞的增殖。3.為了探討DNM3對HCC肝癌細(xì)胞的腫瘤抑制效應(yīng)，本研宄通過將DNM3cDNA載體轉(zhuǎn)染到SMMC-7721細(xì)胞屮，使DNM3在細(xì)胞屮形成過表達(dá)情況。轉(zhuǎn)染后96小時，通過qRT-PCR和WesternBlot法檢測過表達(dá)效果，結(jié)果顯示：SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染DNM3cDNA載體后，其DNM3在mRNA水平和蛋白水平均表達(dá)增多。
8、CCK-8細(xì)胞活性檢測結(jié)果顯示,DNM3過表達(dá)對SMMC-7721細(xì)胞的增殖活動具有顯著的抑制作用；采用流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，凋亡細(xì)胞的百分比從1.3°/。顯著升尚至13.1%;采用westernblot
