lupeol對(duì)肝細(xì)胞肝癌抑制作用及其機(jī)制的研究

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1、中文摘要第一章lupeol誘導(dǎo)肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞凋亡并抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)目的：研究lupeol體內(nèi)外抗肝癌作用，從整體、細(xì)胞、分子水平探討其作用機(jī)制：研究其與rTrail聯(lián)合抗肝癌作用。方法：(1)采用MTT法研究luepol體外對(duì)HCC細(xì)胞系細(xì)胞增殖的抑制作用，采用人HCC細(xì)胞系SMMC7721細(xì)胞移植腫瘤裸鼠模型研究lupeol對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用；(2)采用倒置顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)從形態(tài)學(xué)水平和生化角度檢測(cè)luI',eol對(duì)HCC細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)和細(xì)胞周期的影響，采用westemblot方法分析其誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制；(3)采用倒置顯微鏡

2、觀察和流式細(xì)胞術(shù)從形態(tài)學(xué)水平和生化角度檢測(cè)lupeol與rTrail聯(lián)合對(duì)HCC細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)和細(xì)胞周期的影響，確定其聯(lián)合作用是否為協(xié)同作用。結(jié)果：(1)體外抑瘤結(jié)果顯示，lupeol能顯著抑制人HCC細(xì)胞增殖，并且具有量效關(guān)系，作用48h的IC50為40p．mol／L．50I-tmol／L；體內(nèi)模型抑瘤試驗(yàn)結(jié)果顯示，lupeol能顯著抑制人HCC細(xì)胞系SMMC7721細(xì)胞移植腫瘤的生長(zhǎng)；(2)形態(tài)學(xué)倒置顯微鏡觀察和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，lupeol能誘導(dǎo)HCC細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程；westernblot結(jié)果顯示lupeol作用

3、后使促凋亡蛋白caspase．3、cleaved．PARP活化上調(diào)，誘導(dǎo)胞內(nèi)凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；(3)形態(tài)學(xué)倒置顯微鏡觀察和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，lupeol與rTrail聯(lián)合能抑制HCC細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)HCC細(xì)胞凋亡，但其作用只具有累加性，不具有協(xié)同性。結(jié)論：lupeol在體外能誘導(dǎo)HCC細(xì)胞凋亡，并能抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)；但其與rTrail聯(lián)合，只是具有相加作用，不具有協(xié)同性。關(guān)鍵詞：lupeol；肝細(xì)胞肝癌：rTRAIL第二章Lupeol與P13K抑制劑S14161具有協(xié)同抗肝癌作用目的：研究提高lupeol抗肝癌治療效果的方法；從細(xì)胞、基

4、因、蛋白水平探討低濃度lupeol促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用機(jī)制，通過(guò)聯(lián)合P13K信號(hào)通路抑制劑，來(lái)協(xié)同提高lupeol抗肝癌治療效果。生窒塑垂墊壁!!!型壁塑墮壁堡塑塑劁堡旦壁基塑!型堡塞方法：(1)對(duì)lupeol化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，采用MTT方法比較lupeol及其化學(xué)結(jié)構(gòu)改造后衍生物對(duì)HCC細(xì)胞系細(xì)胞增殖的抑制作用；(2)采用MTT方法、流式細(xì)胞術(shù)方法對(duì)比lupeol及其衍生物H2在低濃度區(qū)間對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用、對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，并采用RT-PCR、westernblot方法研究其分子機(jī)制；(3)采用MTT方法檢測(cè)P13K抑

5、制劑S14161對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用，選擇合適濃度，聯(lián)合低濃度lupeol，采用MTT方法檢測(cè)聯(lián)合用藥對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用，并采用westernblot方法研究其分子機(jī)制；(4)采用SMMC7721細(xì)胞移植腫瘤裸鼠模型，研究lupeol聯(lián)合$14161對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果：(1)MTT結(jié)果顯示，lupeol衍生物H1、T1、T2對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用低于lupeol，lupeol對(duì)HCC細(xì)胞作用的IC50為401amol／L-509mol／L，H1、Tl、T2作用的ICs0分別為大于120I．tmol／L、

6、大約50}tmol／L、709mol／L一809mol／L；而衍生物H2對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用優(yōu)于lupeol，IC50小于309mol／L；(2)流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、westernblot結(jié)果顯示，低濃度lupeol不能誘導(dǎo)HCC細(xì)胞凋亡，對(duì)胞內(nèi)促凋亡分子及P13K／Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子的表達(dá)水平作用微小，而低濃度H2能誘導(dǎo)HCC細(xì)胞凋亡，使胞內(nèi)促凋亡分子表達(dá)上調(diào)及P13K／Akt信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)下調(diào)：(3)MTT結(jié)果顯示，S14161對(duì)HCC細(xì)胞作用的ICs0大約為4／amol／L，選取1l-tmol／L和3It

7、mol／L兩個(gè)濃度，進(jìn)行與lupeol的聯(lián)合用藥試驗(yàn)；MTT結(jié)果顯示，lupeol與19mol／L和39mol／LS14161聯(lián)合，協(xié)同促進(jìn)了對(duì)HCC細(xì)胞增殖的抑制作用，低濃度區(qū)間更為明顯；(4)westernblot結(jié)果顯示，lupeol209mol／L聯(lián)合S141611J．tmol／L和3I．tmol／L，協(xié)同下調(diào)了HCC胞內(nèi)P13K／Akt信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)；(5)腫瘤移植裸鼠模型體內(nèi)聯(lián)合用藥結(jié)果顯示，lupeol與S14161協(xié)同抑制了體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。結(jié)論：低濃度lupeol促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)是由于激活了P13K／Akt通路。Lupe

8、ol和$14161單獨(dú)應(yīng)用對(duì)HCC細(xì)胞增殖均有抑制作用，低劑量聯(lián)合有協(xié)同作用，聯(lián)合用藥提高了抗肝癌活性且無(wú)毒副作用。因而lupeol聯(lián)合P13K信號(hào)通路抑制劑可能是更安全有效的抗腫瘤候選藥物，值得進(jìn)一步研發(fā)。關(guān)鍵詞：lupeol；S1