lupeol對肝細胞肝癌抑制作用及其機制的研究

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1、中文摘要第一章lupeol誘導肝細胞肝癌細胞凋亡并抑制體內(nèi)腫瘤生長目的：研究lupeol體內(nèi)外抗肝癌作用，從整體、細胞、分子水平探討其作用機制：研究其與rTrail聯(lián)合抗肝癌作用。方法：(1)采用MTT法研究luepol體外對HCC細胞系細胞增殖的抑制作用，采用人HCC細胞系SMMC7721細胞移植腫瘤裸鼠模型研究lupeol對體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用；(2)采用倒置顯微鏡、流式細胞術從形態(tài)學水平和生化角度檢測luI',eol對HCC細胞凋亡的誘導和細胞周期的影響，采用westemblot方法分析其誘導凋亡的機制；(3)采用倒置顯微鏡

2、觀察和流式細胞術從形態(tài)學水平和生化角度檢測lupeol與rTrail聯(lián)合對HCC細胞凋亡的誘導和細胞周期的影響，確定其聯(lián)合作用是否為協(xié)同作用。結果：(1)體外抑瘤結果顯示，lupeol能顯著抑制人HCC細胞增殖，并且具有量效關系，作用48h的IC50為40p．mol／L．50I-tmol／L；體內(nèi)模型抑瘤試驗結果顯示，lupeol能顯著抑制人HCC細胞系SMMC7721細胞移植腫瘤的生長；(2)形態(tài)學倒置顯微鏡觀察和流式細胞術結果顯示，lupeol能誘導HCC細胞凋亡，阻滯細胞周期進程；westernblot結果顯示lupeol作用

3、后使促凋亡蛋白caspase．3、cleaved．PARP活化上調(diào)，誘導胞內(nèi)凋亡信號轉導；(3)形態(tài)學倒置顯微鏡觀察和流式細胞術結果顯示，lupeol與rTrail聯(lián)合能抑制HCC細胞增殖，誘導HCC細胞凋亡，但其作用只具有累加性，不具有協(xié)同性。結論：lupeol在體外能誘導HCC細胞凋亡，并能抑制體內(nèi)腫瘤生長；但其與rTrail聯(lián)合，只是具有相加作用，不具有協(xié)同性。關鍵詞：lupeol；肝細胞肝癌：rTRAIL第二章Lupeol與P13K抑制劑S14161具有協(xié)同抗肝癌作用目的：研究提高lupeol抗肝癌治療效果的方法；從細胞、基

4、因、蛋白水平探討低濃度lupeol促進腫瘤生長的作用機制，通過聯(lián)合P13K信號通路抑制劑，來協(xié)同提高lupeol抗肝癌治療效果。生窒塑垂墊壁!!!型壁塑墮壁堡塑塑劁堡旦壁基塑!型堡塞方法：(1)對lupeol化學結構進行改造，采用MTT方法比較lupeol及其化學結構改造后衍生物對HCC細胞系細胞增殖的抑制作用；(2)采用MTT方法、流式細胞術方法對比lupeol及其衍生物H2在低濃度區(qū)間對HCC細胞增殖的抑制作用、對細胞凋亡的誘導作用，并采用RT-PCR、westernblot方法研究其分子機制；(3)采用MTT方法檢測P13K抑

5、制劑S14161對HCC細胞增殖的抑制作用，選擇合適濃度，聯(lián)合低濃度lupeol，采用MTT方法檢測聯(lián)合用藥對HCC細胞增殖的抑制作用，并采用westernblot方法研究其分子機制；(4)采用SMMC7721細胞移植腫瘤裸鼠模型，研究lupeol聯(lián)合$14161對體內(nèi)腫瘤生長的抑制作用。結果：(1)MTT結果顯示，lupeol衍生物H1、T1、T2對HCC細胞增殖的抑制作用低于lupeol，lupeol對HCC細胞作用的IC50為401amol／L-509mol／L，H1、Tl、T2作用的ICs0分別為大于120I．tmol／L、

6、大約50}tmol／L、709mol／L一809mol／L；而衍生物H2對HCC細胞增殖的抑制作用優(yōu)于lupeol，IC50小于309mol／L；(2)流式細胞術、RT-PCR、westernblot結果顯示，低濃度lupeol不能誘導HCC細胞凋亡，對胞內(nèi)促凋亡分子及P13K／Akt信號通路關鍵分子的表達水平作用微小，而低濃度H2能誘導HCC細胞凋亡，使胞內(nèi)促凋亡分子表達上調(diào)及P13K／Akt信號通路關鍵分子表達下調(diào)：(3)MTT結果顯示，S14161對HCC細胞作用的ICs0大約為4／amol／L，選取1l-tmol／L和3It

7、mol／L兩個濃度，進行與lupeol的聯(lián)合用藥試驗；MTT結果顯示，lupeol與19mol／L和39mol／LS14161聯(lián)合，協(xié)同促進了對HCC細胞增殖的抑制作用，低濃度區(qū)間更為明顯；(4)westernblot結果顯示，lupeol209mol／L聯(lián)合S141611J．tmol／L和3I．tmol／L，協(xié)同下調(diào)了HCC胞內(nèi)P13K／Akt信號通路的轉導；(5)腫瘤移植裸鼠模型體內(nèi)聯(lián)合用藥結果顯示，lupeol與S14161協(xié)同抑制了體內(nèi)腫瘤的生長。結論：低濃度lupeol促進腫瘤生長是由于激活了P13K／Akt通路。Lupe

8、ol和$14161單獨應用對HCC細胞增殖均有抑制作用，低劑量聯(lián)合有協(xié)同作用，聯(lián)合用藥提高了抗肝癌活性且無毒副作用。因而lupeol聯(lián)合P13K信號通路抑制劑可能是更安全有效的抗腫瘤候選藥物，值得進一步研發(fā)。關鍵詞：lupeol；S1