實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察

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1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)ExperimentofMedicalMicrobiology基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室楊致邦2010.1教材高等醫(yī)學(xué)院?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)系列教材?病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?科學(xué)出版社，2008年6月主編楊致邦葉彬掌握病原生物學(xué)的基本方法與基本操作技術(shù)；強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室生物安全觀念，掌握無菌操作技術(shù)；加深對(duì)病原生物學(xué)基本理論知識(shí)的理解與認(rèn)識(shí)；培養(yǎng)獨(dú)立操作、獨(dú)立觀察和思考、獨(dú)立分析問題和解決實(shí)際問題的能力；增強(qiáng)科技創(chuàng)新能力；培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖黠L(fēng)、科學(xué)的方法和嚴(yán)肅認(rèn)真的工作態(tài)度。實(shí)驗(yàn)教學(xué)的目標(biāo)臨床醫(yī)學(xué)本科實(shí)驗(yàn)內(nèi)

2、容及安排實(shí)驗(yàn)課的帶教內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)顯微鏡錄像1細(xì)菌形態(tài)觀察4需要2細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象與消毒滅菌4有3致病性球菌4需要有4腸道桿菌4有5白喉?xiàng)U菌、厭氧菌4需要6四體、真菌、病毒4需要有臨床藥學(xué)本科實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及安排實(shí)驗(yàn)課的帶教內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)顯微鏡錄像1細(xì)菌形態(tài)觀察4需要2細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象與消毒滅菌4有3致病性球菌4需要有4藥物的微生物檢測(cè)45藥物的敏感性實(shí)驗(yàn)46四體、真菌、病毒4需要有非臨床醫(yī)學(xué)本科實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及安排實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容學(xué)時(shí)數(shù)顯微鏡錄像1細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察4需要2細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象與消毒滅菌4有3四體、真菌、病毒4需要有實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察ObserveonMo

3、rphologyandStructureofBacteria【目的要求】1.熟悉實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)則,掌握無菌操作技術(shù)；2.掌握細(xì)菌標(biāo)本革蘭染色的操作步驟和方法；顯微鏡(油鏡)下細(xì)菌形態(tài)的觀察;革蘭染色結(jié)果判斷；3.掌握細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（莢膜、鞭毛、芽孢）的形態(tài)特點(diǎn)?！緦?shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)則(P3)；2.細(xì)菌標(biāo)本革蘭染色觀察（Gram’sStain)(每人做）(P10)；3.復(fù)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用(每人做）；4.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（莢膜、鞭毛、芽胞）的觀察（示教鏡）(P104)?！緦?shí)驗(yàn)材料】(1)菌種:葡萄球菌、大腸桿菌斜面培養(yǎng)物。(2)試劑

4、:革蘭染色液。(3)其他:生理鹽水、載玻片、酒精燈、接種環(huán)、顯微鏡、香柏油、擦鏡紙、二甲苯等?！緦?shí)驗(yàn)方法】1．細(xì)菌涂片的制作步驟：涂片干燥固定注意點(diǎn)：1）無菌操作2）加生理鹽水（固體培養(yǎng)物）生理鹽水生理鹽水生理鹽水+++葡萄球菌大腸桿菌葡萄球菌+大腸桿菌載玻片2.革蘭染色1)方法初染:結(jié)晶紫和碳酸氫鈉各1～3滴,3s-5s，水沖凈,甩干。媒染:碘液1～3滴,3s-5s秒鐘，水沖凈,甩干。脫色:95%乙醇數(shù)滴,5s-10s,水沖凈,甩干。復(fù)染:稀釋石炭酸復(fù)紅液1～3滴,10s，水沖凈,甩干。關(guān)鍵步驟：掌握脫色程度?！窘Y(jié)果觀察】指標(biāo):形態(tài)、染色性、

5、排列。染色性判斷：革蘭陽性菌染成藍(lán)紫色,革蘭陰性菌染成紅色。3.觀察標(biāo)本片自然干燥或在酒精燈火焰上烤干后,在涂菌處滴加1滴香柏油,油鏡下觀察。Gram’sStain,×1000葡萄球菌:革蘭陽性球菌,成堆或呈葡萄狀排列。大腸桿菌:革蘭陰性桿菌,不規(guī)則分散排列。Gram’sStain,×10004.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（莢膜、鞭毛、芽胞）的觀察注意點(diǎn)：觀察時(shí)只能動(dòng)顯微鏡的微調(diào),不要?jiǎng)游恢?。要求：畫圖記錄。1）破傷風(fēng)桿菌的芽胞:芽胞染色×1000鞭毛染色×10002)變形桿菌的鞭毛:3)肺炎鏈球菌的莢膜:莢膜染色×1000【實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)】1.生物安全、無菌操

6、作,菌種管清理；2.顯微鏡(油鏡)的使用——用后擦鏡頭；3.用過的載玻片放進(jìn)有消毒水的玻缸。4.做好清潔衛(wèi)生?！緦?shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容】1.細(xì)菌標(biāo)本革蘭染色觀察（方法、結(jié)果畫圖、討論）；2.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（莢膜、鞭毛、芽胞）觀察（畫圖）?！緦?shí)驗(yàn)報(bào)告示范】實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)則（每人掌握）；2.細(xì)菌標(biāo)本革蘭染色觀察（Gram’sStain)(每人做）；3.復(fù)習(xí)顯微鏡(油鏡)的使用(每人做）；4.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)（莢膜、鞭毛、芽胞）的觀察（示教鏡）。【實(shí)驗(yàn)材料和方法】一、細(xì)菌標(biāo)本革蘭染色觀察1．細(xì)菌涂片的制作菌種：葡萄球菌、大腸

7、桿菌斜面培養(yǎng)物方法：涂片干燥固定1）涂片：在酒精燈火焰旁用接種環(huán)無菌操作取生理鹽水和葡萄球菌、大腸桿菌斜面培養(yǎng)物，涂抹、混勻于載玻片上，如下圖：生理鹽水生理鹽水生理鹽水+++葡萄球菌大腸桿菌葡萄球菌+大腸桿菌3）固定將載玻片以均勻的速度通過酒精燈火焰來回3次。2）干燥將涂片在酒精燈火焰上方約20cm高處烤干。2.革蘭染色1)方法初染:結(jié)晶紫和碳酸氫鈉各1～3滴,3s-5s，水沖凈,甩干。媒染:碘液1～3滴,3s-5s秒鐘，水沖凈,甩干。脫色:95%乙醇數(shù)滴,5s-10s,水沖凈,甩干。復(fù)染:稀釋石炭酸復(fù)紅液1～3滴,10s，水沖凈,甩干。3.觀

8、察將標(biāo)本片在酒精燈火焰上烤干后,在涂菌處滴加1滴香柏油,油鏡下觀察。4.結(jié)果見圖1:葡萄球菌:革蘭陽性球菌,成堆或呈葡萄狀排列大腸桿菌:革蘭陰性桿菌,