成年大鼠骨骼肌成肌細胞的原代培養(yǎng)

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1、成年大鼠骨骼肌成肌細胞的原代培養(yǎng)【摘要】目的探索成年大鼠骨骼肌成肌細胞的原代培養(yǎng)方法。方法　取成年.編輯?！娟P鍵詞】骨骼肌成肌細胞原代培養(yǎng)大鼠成年【Abstract】Objective：ToexploreanexperimentalmethodforprimarycultureofadultratskeletalmusclesarcoblastMethods:Muscleofposteriorlimbfromethod.Thecellsicroscopybinedberofskeletalmusclesa

2、rcoblast118permillilitre.skeletalmusclesarcoblastcelldifferentiationaccreditshoyogenin.Conclusions:　TissueculturemethodconvenientlypermitsthepurificationandProliferationofmyoblast.Theseesultsprovidethebasisforfuturestudiestoassesstheabilityofthecellstorep

3、airheartfailure.【Keyusclesarcoblastprimarycultureratadult心肌細胞是終末化組織，不能再生。心梗后壞死的心肌必然被纖維組織代替。當前內外科的治療均不能修復及逆轉已經壞死的心肌，壞死的部分經過心臟重構，最終發(fā)展為缺血性心力衰竭，其5年生存率不到50％，缺血性心衰的病理生理有多種因素參與，但喪失心肌細胞是主要原因。如何攻克缺血性心力衰竭已成為本世紀的最大課題。目前治療終末期心力衰竭的唯一有效方法是心臟移植，而心臟移植受到器官來源、經費、免疫排斥反應方面的限

4、制，能夠接受心臟移植手術的病人目前每年只能達到近百例，目前細胞移植已經成為治療缺血性心衰最有前景的方法之一。心肌細胞移植是向心肌梗死疤痕區(qū)注入某些肌源性未成熟或未分化的細胞成分，這些細胞在心肌的微環(huán)境下能夠成熟，向心肌細胞轉化，改善心功能。骨骼肌成肌細胞是首先應用于臨床試驗、并在臨床試驗中研究最多的移植細胞。越來越多的證據(jù)表明，相比較間質干細胞而言，骨骼肌成肌細胞可能是更為理想的干細胞移植對象，其原因有以下幾點：①骨骼肌成肌細胞對缺血、缺氧的環(huán)境更為耐受；②骨骼肌成肌細胞可以確定的轉化成橫紋肌特性的肌細胞

5、；③骨骼肌成肌細胞容易提取、分立、培養(yǎng)和增殖[1,2]。1材料與方法選用成年EM培養(yǎng)基、ham，sF-10培養(yǎng)液、低糖DMEM培養(yǎng)基、小牛血清gaba公司產品骨骼肌成肌細胞獲取、分離、培養(yǎng)及標記選用成年g/ml,37'C)，繼之放PBS—EDTA(0.25％)中37℃下20分鐘，置入100一um細胞過濾器中，過濾后離心,細胞置于F-10培養(yǎng)液中,1％青鏈霉素(10000單位/ml)，放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(37℃,5％co2)。3d換液一次,待細胞長滿瓶底即可傳代。2結果成肌細胞的培養(yǎng)　采用組織塊培養(yǎng)法貼塊

6、2d后即可見有細胞從肌小粒邊緣爬出,細胞呈梭形,胞漿透明。1周后細胞可長滿瓶底的60%～70%,其數(shù)目可達105,此時細胞可呈多角形,充分伸展,部分細胞密集區(qū)可見細胞呈向心性生長,相互間排列整齊,類似骨骼肌的縱切面。成肌細胞的分化鑒定　換用誘導分化液后細胞可在3d內分化,融合交織形成肌纖維,可觀察到收縮現(xiàn)象;并且部分細胞分化形成細長的肌管,高倍鏡下可見多個核及核分裂象。這些現(xiàn)象為成肌細胞所特有,可以作為簡便的鑒定方法。3討論目前最大的動物和臨床研究資料是使用骨骼肌成肌細胞，它存在于成人骨骼肌中，在創(chuàng)傷后可

7、增生，重構肌肉。近10年來有諸多關于在鼠與綿羊將骨骼肌成肌細胞成功移植到心肌的研究報告。它們顯示可將自體骨骼肌成肌細胞注射到受損心肌內，形成橫紋肌。2000年6月15日成肌細胞移植首先應用于臨床[3]。1期臨床試驗的成功證實了此方法的可行性[4]。然而在試驗中唯一不利的事件是移植后心律失常的發(fā)生。然而在試驗中唯一不利的事件是移植后心律失常的發(fā)生，在早期（術后3周內）發(fā)生在4例患者中，除一例患者耐受。發(fā)生原因可能由于骨骼肌成肌細胞不能形成心肌細胞間的間隙連結，它們不能與心肌本身的細胞等速進行電傳導，從而易導

8、致惡性心律失常。但FormigliL等的研究表明，骨骼肌成肌細胞缺血心肌移植后骨骼肌成肌細胞可以和心肌細胞之間形成通道連接，松弛素可以增強這種細胞間連接[5]。我們采用組織塊法成功培養(yǎng)了成年大鼠的成肌細胞,組織塊培養(yǎng)法實用、可行,耗材少、成本低,可獲得含量超過90%以上的成肌細胞。采用此方法培養(yǎng)成肌細胞,短期內獲得大量成肌細胞成為可能,也為我們進一步開展成肌細胞心肌內自體移植創(chuàng)造了條件。我們的研究結果意圖在于貼近臨床,為心力衰