綿羊igfbp―1基因的克隆及序列分析

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1、摘要:試驗(yàn)以涼山半細(xì)毛羊?yàn)檠芯繉?duì)象,采用RT-PCR方法克隆了IGFBP-1基因的CDS全序列,生物信息學(xué)方法深入分析其序列。結(jié)果表明,IGFBP-1基因的CDS序列為792bp,編碼263個(gè)氨基酸,與牛、人、鼠的CDS同源性分別為97%、76%和74%,氨基酸序列同源性分別為97%、69%和71%,GenBank登錄號(hào)為FJ589639.1;IGFBP-1基因的氨基酸分子量為27.8kD,理論等電點(diǎn)(pl)為5.99;進(jìn)化分析顯示與牛、山羊等哺乳動(dòng)物關(guān)系較近,與雞、魚類等親緣關(guān)系較遠(yuǎn);IGFBP-1基因存在明顯的疏

2、水性區(qū)域和親水性區(qū)域,有一個(gè)信號(hào)肽、一個(gè)跨膜區(qū)、16個(gè)磷酸化位點(diǎn)、6個(gè)N-糖基化位點(diǎn)和8個(gè)0-糖基化位點(diǎn);二級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示無規(guī)卷曲、a-螺旋和折疊區(qū)域分別為61.98%、24.33%、13.69%;三級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示存在IGFBP_N和甲狀腺球蛋白-I型功能域。為進(jìn)一步研究綿羊IGFBP-1基因的功能奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:IGFBP-1基因;克?。痪d羊中圖分類號(hào):S858.26文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0439-8114(2015)05-1139-05DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.201

3、5.05.028Abstract:UsingLiangshansemi-finewoolsheepasmaterial,thewholeCDSsequeneeofIGFBP-1genewasclonedwithRT-PCRandanalyzeditssequencesbybioinforma廿cs.TheresultsshowedthattheCDSsequeneeofIGFBP-1genewas792bp,encoding263aminoacids?TheCDShomologywithbovine,humanand

4、ratwas97%,76%and74%,respective!y.Theaminosequeneehomologywas97%,69%and71%,respective!y.ItsaccessionnumberinGenBankwasFJ589639.1.Itsaminomolecularweightwas27.8kD.Thetheoreticalisoelectricpoint(pl)was5.99?Thephylogeneticanalysisshowedthatitwasclosetocattleandgoat

5、andfarfromchicken,fish,etc?TheIGFBP-1hadobvioushydrophobicandhydrophilicregion,asignalpeptide,atransmembraneregion,16sitesofphosphorylation,6sitesofN-glycosylationand8sitesofO-glycosylation.Therandomcoil,a-helixandB-sheetregioninsecondarystructurewas61.98%,24.3

6、3%,13.69%,respective!y.ThetetiarystructureanalysisshowedthatithadaIGFBP_Ndomainandathyroglobulin-Itypeofdomain.ItwillprovideascientificbasisforfurtherstudyingthefunctionofIGFBP-1geneinsheep?Keywords:IGFBP-1gene;clone;sheep胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)是胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白家族(I

7、GFBPs)的成員之一,調(diào)節(jié)胰島素樣生長因子I和胰島素樣生長因子II的促有絲分裂和新陳代謝作用[1],在低氧或饑餓、營養(yǎng)不良、糖尿病等不利條件下,哺乳動(dòng)物外周和肝臟中IGFBP-1mRNA水平顯著增加[2],降低IGFBP-1的水平,會(huì)導(dǎo)致葡萄糖耐受性降低、血壓升高,甚至引起肥胖[3-5],IGFBP-1能抑制依賴于IGF-I的細(xì)胞生長和分化[6],高表達(dá)使生物池中IGF-I的可用量減少[7],引起動(dòng)物機(jī)體(如鼠)的出生體質(zhì)量下降⑻。Ou等⑼運(yùn)用PIRA-RFLP技術(shù)檢測(cè)北京油雞的IGFBP-1基因5’的單核昔酸多態(tài)

8、性,發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與北京油雞群體的生長有密切關(guān)系,趙秀華等[10]采用SSCP技術(shù)檢測(cè)京海黃雞的IGFBP-1基因外顯子的單核昔酸多態(tài)性,SNP位點(diǎn)對(duì)京海黃雞生長性狀具有一定的影響。有關(guān)綿羊IGFBP-1基因的序列分析、單核昔酸多態(tài)性等報(bào)道較少,本研究以涼山半細(xì)毛羊?yàn)檠芯繉?duì)象,克隆了IGFBP-1基因的全CDS序列,利用生物信息學(xué)方法分析CDS序

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