參芎注射液對大鼠腦缺血再灌注損傷保護作用

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1、參芎注射液對大鼠腦缺血再灌注損傷保護作用摘要：目的：研究參芎注射液對老齡大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用。方法：108只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、尼莫通組、參芎注射液高、中、低劑量組(36.4,18.2，9.1mL?kg_l?d_l)。采用線栓法建立大鼠腦缺血再灌注模型，觀察參芎注射液對腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能評分、腦梗死體積的影響，檢測腦組織中一氧化氣合酶(N0S)、一氧化氮(N0)、超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)的含量，ELISA法檢測對腦組織中腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細胞介素-10(IL-1P)水平的影響。結(jié)果：參芎注射液可顯著降

2、低腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能評分，減輕腦組織損傷程度，減少腦梗死范E提高SOD活力，降低MDA，NO,NOS,LDH水平，抑制IL-1P和TNF-a的表迗。結(jié)論：參芎注射液對大鼠缺血再灌注損傷具有明顯的保護作用，其機制可能與改善神經(jīng)功能、減少自由基損傷和抑制炎癥因子表達有關(guān)。關(guān)鍵詞：參芎注射液；腦缺血再灌注損傷；自由基；炎癥因子；神經(jīng)功能［稿件編號］2013-06-21［基金項目］國家自然科學基金項目(81173647,81202636，81274176）；浙江省自然科學基金項目（LR12H27001）；浙江省衛(wèi)生高層次創(chuàng)新人才培養(yǎng)工程項目；浙江省中醫(yī)藥（中西醫(yī)結(jié)合）重點學科項目（2012-

3、XK-A06）［通信作者］*楊潔紅，Tel:13758244937，E-mail：yannoo7376@sina.com［作者簡介］汪興宇，Tel:（0571）86613716，E-mail：489373697@qq.com近年來，腦缺血再灌注損傷的研究已經(jīng)引起了國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注，大量研究［1-3］表明腦缺血再灌注損傷主要與自由基連鎖反應、炎癥反應、鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性和細胞凋亡等有關(guān)。許多研究［4-5］表明丹參和川芎對腦缺血損傷的氧化、炎癥及神經(jīng)功能損傷等有較明顯的改善作用。參芎葡萄糖注射液為丹參提取物和川芎嗪復合的針劑，對腦缺血再灌注大鼠的血液流變學、神經(jīng)細胞凋亡等損傷有較好

4、的改善作用［6-7］，但有關(guān)自由基損傷和炎癥損傷方面的研究較少。本實驗采用線栓法建立局灶性腦缺血再灌注（MCAO）模型，研究參芎注射液對腦缺血再灌注損傷中的神經(jīng)功能損傷、自由基損傷和炎癥損傷的改善作用，探討其對缺血腦組織的保護作用及機制。1材料1.1藥品和試劑參芎注射液（吉林四長制藥有限公司，批號20120804）；尼莫通注射液（BayerScheringPharmaAG，批號BXG2GG1）；考馬斯亮藍試劑盒（批號20121206）、MDA檢測試劑盒（批號20121205）、一氧化氮（N0）檢測試劑盒（批號21021123）、SOD試劑盒（批號20121130）、一氧化氮合酶（NOS）檢測

5、試劑盒（批號20121211），以上均購自南京建成生物工程研究所；IL-1PELISA檢測試劑盒（上海源葉生物科技有限公司，批號20121101A）；TNF-aELISA檢測試劑盒（上海源葉生物科技有限公司，批號20121101A）;TTC（北京鼎國昌盛技術(shù)有限責任公司，批號16S10320）。1.2儀器VarioskanFlash型酶標儀（Thermo公司）；Sigma2-16PK離心機（Sigma公司）；TU-1900型雙光束紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；賽多利斯（Sartorius）BS110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。1.3動物清潔級SD大鼠，雄性

6、，體重260?300g，上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，許可證號SCXK（滬）2008-0016。2方法2.1分組與給藥108只SD大鼠隨機分為6組，每組18只，分別為假手術(shù)組（腹腔注射生理鹽水）、模型組（腹腔注射生理鹽水）、參穹注射液低、中、高3個劑量組（9.1，18.2，36.4mL?kg-1?d-1）和尼莫通組（腹腔注射尼莫通注射液5.00mL?kg_l?d_l，相當于尼莫地平1mg?kg-1?d-1）。各組每天腹腔注射給藥2次，于手術(shù)前連續(xù)給藥3d。2.2腦缺血再灌注模型制備參照ZeaLonga等［8］的改良的線栓法制備大腦中動脈栓塞（MCAO）模型：10%水合氯酷（3mL?kg-

7、1）腹腔給藥麻醉大鼠后，分離右領(lǐng)總動脈并剪一小口，將長50mm、直徑0.2mm、頂端燙制成光滑球狀的尼龍線作為栓子插入，以頸總動脈分叉處計算進線深度為（18.5±0.5）mm,至大腦中動脈起始部以完全阻斷供血。缺血1.5h后，拔線栓，再灌注24h。假手術(shù)組只進行麻醉和血管分離術(shù)，不結(jié)扎血管及導入尼龍線。以上過程均在室溫恒定（24?25°C）情況下進行。2.3神經(jīng)功能評分參考Bederson等［9］的方法對各組