黃芪注射液對缺血再灌注大鼠腦組織保護(hù)作用研究

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1、黃罠注射液對缺血再灌注大鼠腦組織保護(hù)作用研究于淼高維娟河北省承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院河北承德067000【摘要】目的：應(yīng)用四血管法建立全腦缺血再灌注損傷模型，觀察腦缺血再灌注7天海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)變化，存活細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞凋亡率的變化。并應(yīng)用黃罠注射液進(jìn)行干預(yù)，對上述指標(biāo)的變化情況進(jìn)行比較，探討黃罠注射液減輕腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制，為黃罠注射液的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。【關(guān)鍵詞】黃罠注射液；腦缺血再灌注；海馬CA1區(qū)；細(xì)胞凋亡【中圖分類號1R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)識碼］B【文章編號J1764-8999(2015)7-0616-

2、01腦血管疾病是目前人類死亡和殘疾的主要原因之一，該病的發(fā)牛主要與腦血流的減少和缺血性腦損傷有關(guān)。研究腦缺血后神經(jīng)元損傷的發(fā)牛機(jī)制以及可能的干預(yù)因素，尋找有效的腦保護(hù)藥物，最大限度地減少神經(jīng)細(xì)胞的急性和遲發(fā)性死亡，保護(hù)腦功能，仍是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。中藥黃罠，應(yīng)用歷史悠久，具有抗炎、抗病毒、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等作用［1］,并有實(shí)驗(yàn)表明對缺血后遲發(fā)性神經(jīng)元損傷有保護(hù)作用［2］,受到醫(yī)家的青睞。鑒于中藥黃罠對腦血管病多靶點(diǎn)治療的作用特點(diǎn)，黃罠對缺血性腦損傷影響的研究也成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。木實(shí)驗(yàn)的研究目的就是探討黃罠注射

3、液減輕腦缺血再灌注損傷的作用機(jī)制，為黃罠注射液的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。1資料和方法1.1方法：木實(shí)驗(yàn)中我們應(yīng)用成木低，種系純合性好，與人類腦血管解剖特性相似的SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動物，采用改良的Pulsinelli四血管法［3］,建立全腦缺血15分鐘再灌注7天損傷模型，并觀察黃罠注射液的作用。此法的優(yōu)點(diǎn)是，檢驗(yàn)缺血是否成功的指標(biāo)明確，能在清醒的動物上復(fù)制。我們將48只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，缺血再灌注模型組，尼莫地平組，黃茂注射液治療組。并選擇應(yīng)用HE染色在光學(xué)顯微鏡下觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)變化及存活神經(jīng)元計(jì)數(shù)；應(yīng)用電鏡觀察海馬C

4、A1區(qū)超微結(jié)構(gòu)變化；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測海馬組織神經(jīng)元凋亡率。1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,各組之間均數(shù)的比較采用單因素方差分析，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：假手術(shù)組：海馬CA1區(qū)神經(jīng)元外形規(guī)則，3~4層，細(xì)胞層排列整齊而致密，核大而圓，透明，有2~2個(gè)明顯核仁，核膜清起。模型組：神經(jīng)元排列紊亂而疏松，外形皺縮，部分細(xì)胞脫失，核固縮深染，胞漿空化，核溶解，核膜境界不清；神經(jīng)元計(jì)數(shù)顯著低于假手術(shù)組(P<

5、;0.01)。尼莫地平組和黃茂注射液治療組相似：大部分神經(jīng)元保持正常形態(tài)，細(xì)胞排列基本規(guī)則，少量細(xì)胞輕度脫失，部分胞染變深，殘存的神經(jīng)元大部分呈可逆性缺血性改變;神經(jīng)元計(jì)數(shù)顯著高于模型組(P<0.01)o2.2海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化：假手術(shù)組：7天后神經(jīng)元細(xì)胞核呈卵圓形，兩層膜結(jié)構(gòu)清晰光滑，核周間隙均勻，核內(nèi)染色質(zhì)均勻分布，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，結(jié)構(gòu)完整，可見高爾基體分布，結(jié)構(gòu)呈扁平囊泡平行排列，線粒體呈圓形、橢圓形，內(nèi)悄清晰可見，基質(zhì)均勻，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)平行排列或散在分布，大量糖原顆粒存在于胞漿中。模型組：細(xì)胞核膜結(jié)構(gòu)模

6、糊，線粒體空泡化明顯，H較多較重，高爾基體不規(guī)則。尼莫地平組和黃茂注射液治療組相似，與模型組相比，海馬病變較輕，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，細(xì)胞器結(jié)構(gòu)較完整，部分細(xì)胞器結(jié)構(gòu)變性。2.3海馬神經(jīng)元凋亡率：與假手術(shù)組相比，模型組神經(jīng)元凋亡率明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，黃茂注射液組和尼莫地平組神經(jīng)元凋亡率顯著降低(P<0.01)；與尼莫地平組相比，黃茂注射液組神經(jīng)元凋亡率無明顯變化(P>0.05)o3討論腦血管病是臨床常見多發(fā)性疾病，其致殘率及致死率極高，是人類當(dāng)前三大死亡原因之一，而缺血性腦血管病約占全部腦血管病的

7、7%左右［4］。缺血性腦血管病尤其是腦缺血再灌注損傷對人類健康的危害極大。腦缺血再灌注損傷的機(jī)制十分復(fù)雜，早期一直認(rèn)為腦血供減少，能量衰竭發(fā)揮主要作用。但進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，缺血缺氧引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)能量衰竭為觸發(fā)點(diǎn)，造成一系列缺血損傷的級聯(lián)反應(yīng)，在缺血再灌注損傷中發(fā)揮垂要作用。包括自由基引起的脂質(zhì)過氧化損傷、神經(jīng)遞質(zhì)的改變、興奮性氨基酸毒性、鈣超載及炎癥介質(zhì)的作用等。全腦缺血在臨床上常見于休克、窒息、心肌梗死、嚴(yán)重的心律失常、呼吸衰竭等造成的腦部低灌流狀態(tài)，缺血范圍廣泛，而腦組織對氧和葡萄糖的儲存幾乎為零，缺血后數(shù)分鐘即可出現(xiàn)神經(jīng)

8、元的壞死，腦損傷的嚴(yán)重程度與缺血缺氧時(shí)間呈正相關(guān)，因此迅速恢復(fù)腦的血液供應(yīng)，終止缺血狀態(tài)及缺血所造成的腦損傷，有極其重要的臨床意義。然而人量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腦缺血缺氧再灌注引起炎癥性反應(yīng)及氧自由基生物膜損害導(dǎo)致部分損傷細(xì)胞繼發(fā)性死亡［5,6］,即存在再