冷鮮豬肉中甲單胞菌分離及其鑒定方法

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1、冷鮮豬肉中假單胞菌分離及其鑒定方法一.知識(shí)背景革蘭氏染色機(jī)制：革蘭氏染色反應(yīng)與細(xì)菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)有著密切的關(guān)系。目前大多認(rèn)為，經(jīng)過染色和媒染之后，在細(xì)菌的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)上染上了結(jié)晶紫--腆的復(fù)合物。革蘭氏陽性菌由于細(xì)胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層次多，交聯(lián)度高，結(jié)構(gòu)較緊密，故用95%乙醇脫色時(shí)，肽聚糖網(wǎng)孔會(huì)因脫水而明顯收縮，加上革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁基木上不含脂類，乙醇處理時(shí)不能在壁上溶岀縫隙。因此，結(jié)晶紫--碘復(fù)合物仍被牢牢的阻留在細(xì)胞壁以內(nèi)，使菌體呈現(xiàn)紫色。反之，革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁較薄，肽聚糖層薄，交聯(lián)度低，結(jié)

2、構(gòu)疏松，用乙醇來處理的時(shí)候，肽聚糖網(wǎng)孔不易收縮。同時(shí)，由于革蘭氏陰性菌的外壁層脂類含量較高，當(dāng)乙醇將脂類溶解后，細(xì)胞壁上就會(huì)出現(xiàn)較大縫隙為使其通透性增大，所以結(jié)晶紫--碘復(fù)合物就會(huì)被溶出細(xì)胞壁。這時(shí)再用番紅等紅色染液進(jìn)行復(fù)染，這可使革蘭氏陰性菌發(fā)細(xì)胞壁呈現(xiàn)復(fù)雜的紅色，而革蘭氏陽性菌則仍然呈現(xiàn)紫色。涂布T板法英文名為spreadplatemethod,由于將食菌材料現(xiàn)加到還較燙的培養(yǎng)基屮再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且采用稀釋倒平臺(tái)法也會(huì)使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長(zhǎng)，因此在微生物學(xué)研

3、究中更常用的純種分離方法是涂布平板法。徒步平板法分離:由于需要分離的菌種是假單胞菌，所以選擇的培養(yǎng)基只要實(shí)驗(yàn)室通用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱普通肉湯培養(yǎng)基），先將己溶化的培養(yǎng)基倒入無菌平皿，制成無菌平板，將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂布棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表而，如果稀釋得當(dāng)，在平板表而就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖起來形成的。挑取單個(gè)菌落經(jīng)移植培養(yǎng)或重復(fù)以上操作多次，即可獲得純培養(yǎng)。由于用涂布分離法主要缺點(diǎn)是涂布物問題和菌落重疊問題，所以我們要運(yùn)用初

4、步的鑒定，再取兒個(gè)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。假單胞菌是冷鮮豬肉中主要的腐敗菌，屬于細(xì)菌類，是一類革蘭陰性菌，需氧，冷藏低溫下能迅速生長(zhǎng)。假單胞菌是直或微彎桿菌，單個(gè)，卵圓到短桿，有的長(zhǎng)桿，極生鞭毛，可運(yùn)動(dòng)少數(shù)種不運(yùn)動(dòng)。菌苔不明顯呈色，可產(chǎn)生水溶性色素。化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型，需氧，在自然界分布廣。某些菌株具有很強(qiáng)的分解脂肪和蛋白質(zhì)的能力?？稍谑称繁砻嫜杆偕L(zhǎng)，一般產(chǎn)生水溶性色素，氧化產(chǎn)物和粘液，引起食品產(chǎn)生異味及變質(zhì)，很多在低溫下能良好地生長(zhǎng)，所以是冷藏食品腐敗變質(zhì)的主要原因。如熒光假單胞菌仔低溫不可使牛肉，牛乳及乳制品腐敗，

5、腐敗假單胞菌可使魚，牛奶及乳制品變質(zhì)，可使牛奶的表面出現(xiàn)污點(diǎn)。主要用途為生產(chǎn)維生素C,抗生素和多種酶等。所以，在有氧冷藏條件下，假單胞菌可導(dǎo)致一些肉制品，乳制品，水產(chǎn)品等高蛋G含量的食品腐敗變質(zhì)，影響產(chǎn)品和貨架期，造成經(jīng)濟(jì)損失，因此對(duì)假單胞菌的檢測(cè)顯的及其重要。一.報(bào)告目的通過此次的報(bào)告，能更加深入的了解細(xì)菌的結(jié)構(gòu)及其基本特征，并且通過自學(xué)學(xué)習(xí)到細(xì)胞的分離技術(shù)及對(duì)細(xì)菌的鑒定方法，也學(xué)習(xí)到了革蘭氏染色機(jī)制，并且會(huì)運(yùn)用此機(jī)制來進(jìn)行細(xì)菌的鑒定。并通過此次的報(bào)告學(xué)4到更多的食品微生物學(xué)技術(shù)。二.報(bào)告思路通過查找有關(guān)文獻(xiàn)及

6、資料了解假單胞菌，在大概知道了假單胞菌之后，在通過書木上的知識(shí)進(jìn)行假單胞菌的詳細(xì)了解。利用假單胞菌的微生物學(xué)特性進(jìn)行分離及培養(yǎng)，在利用書本上關(guān)于革蘭氏染色的機(jī)制和與氧化酶的生化反應(yīng)為陽性來確定是否為假單胞菌。!1!假單胞菌的特性:假單胞菌(Pseudomonas)為革蘭氏陰性菌，直或微彎的桿狀好氧性細(xì)菌，無芽孢，以極生鞭毛運(yùn)動(dòng)，有少數(shù)種不運(yùn)動(dòng)。假單胞菌屬分布很廣，在水、污水、土壤和空氣中均存在，有的種對(duì)人、動(dòng)物或植物有致病性。假單胞菌常常是導(dǎo)致肉品腐敗的優(yōu)勢(shì)菌，假單胞菌屬的焚光假單胞菌(Ps.fluorescen

7、s)、莓實(shí)假單胞菌（Ps.fragi）、隆德假革胞菌（Ps.lundensis）是最重要的肉制品腐敗菌種。分離微生物菌種的初步鑒定:1.通過群體形態(tài)觀察，獲取單一純種。在劃線或稀釋等培養(yǎng)后的平板上，挑取形態(tài)與FI的菌相同大小的單一菌落移接至固體斜面培養(yǎng)基，待做初步鑒定和保種用。2.細(xì)胞形態(tài)觀察通過顯微鏡對(duì)細(xì)胞個(gè)體形態(tài)特征的觀察，可以較方便地識(shí)別不同種類的微生物。3.細(xì)胞染色觀察對(duì)形態(tài)上難以區(qū)分的微生物，通過細(xì)胞染色手段進(jìn)行鑒別。例如，革蘭氏染色反應(yīng)就是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。它是通過細(xì)菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成

8、不同而分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。某些細(xì)菌兵有芽孢，莢膜，鞭毛和異染顆粒等特殊結(jié)構(gòu)，可利用特殊的染色法進(jìn)行鑒別。4.生理生化性能鑒定生化反應(yīng)通常用來鑒別在形態(tài)方面不易區(qū)別的微生物。它是根據(jù)各類微生物體內(nèi)的酶系統(tǒng)和代謝產(chǎn)物的不同，通過生化反應(yīng)測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物進(jìn)而鑒別。例如，糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，甲基紅實(shí)驗(yàn)，吲哚實(shí)驗(yàn)等。5.生存環(huán)境測(cè)試每種微生物都有自己最佳的生存條件，包括溫度