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《用同源重組的方法進(jìn)行基因修復(fù)(1)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、畢業(yè)論文設(shè)計(jì)題目用同源重組的方法進(jìn)行基因修復(fù)目錄摘要iAbstractii第一章同源重組技術(shù)的研究進(jìn)展11前言11.1微生物育種技術(shù)概述11.2同源重組技術(shù)發(fā)展21.3Red同源重組技術(shù)31.4CRISPR介導(dǎo)基因的編輯技術(shù)4第二章質(zhì)粒ptarget的構(gòu)建81材料81.1菌株和質(zhì)粒81.2培養(yǎng)基與常用溶液81.4克隆中所用到的引物91.5儀器92方法92.1PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件102.2凝膠回收102.3gibson112.4將質(zhì)粒Ptarget導(dǎo)入DH5α中112.5ptarget中N20的測序122.6ptarget質(zhì)粒提取123結(jié)果分析12
2、3.1ptarget質(zhì)粒的構(gòu)建123.2N20測序?qū)Ρ?34討論14第三章基因組片段的獲取與驗(yàn)證151材料151.1菌株和質(zhì)粒151.2引物151.3大腸桿菌培養(yǎng)基161.4儀器162方法162.1細(xì)菌基因組的分離172.2PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件182.3DNA片段的回收與純化192.4T克隆的反應(yīng)體系與反應(yīng)條件192.5化學(xué)轉(zhuǎn)化202.6T—clonevector的菌落驗(yàn)證PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件203結(jié)論與分析203.1mu-BL21基因組DNAtyrA、tnaB、talB、gabD、gabT基因的驗(yàn)證204討論21第四章基因同源重組221材料
3、221.1菌體和質(zhì)粒221.2培養(yǎng)基與常用溶液221.2.2常用溶液與試劑231.3引物231.4儀器232方法242.1wt-BL21感受態(tài)的制備242.2cas9質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化242.3wt-BL21/cas9感受態(tài)的制備242.4各基因片段的同源重組252.5重組驗(yàn)證菌落PCR的反應(yīng)體系與反應(yīng)條件252.6同源重組成功的單克隆的獲取262.7Ptarget和cas9質(zhì)粒的去除283結(jié)果與分析284．討論29第五章回補(bǔ)基因?qū)w生長和色氨酸生產(chǎn)的影響301材料301.1菌種和質(zhì)粒302方法302.1RBS8質(zhì)粒的擴(kuò)增302.2mut-B8/mut-
4、RBS8中mut-RBS8質(zhì)粒的剔除312.3BL21、mut-B8、wt-B8、holo-B8感受態(tài)的制備312.4RBS8質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)化312.5校正曲線制作312.6wt-BL8、holo-BL8和BL21生長曲線的對(duì)比312.7色氨酸含量的測定323結(jié)果分析324討論35參考文獻(xiàn)36致謝37摘要誘變育種是工業(yè)上獲得性能優(yōu)良的菌株的必要手段，但是在對(duì)表達(dá)載體進(jìn)行生物誘變時(shí)，就會(huì)不可避免的造成工程菌本身染色體的變異，為研究這些染色體的變異對(duì)工程菌本身的影響，本實(shí)驗(yàn)使用同源重組技術(shù)對(duì)通過artp誘導(dǎo)突變的BL8（BL21表達(dá)菌敲出3個(gè)基因后的工程菌）
5、工程菌進(jìn)行基因替換,并以色氨酸定位研究對(duì)象，觀察其產(chǎn)率上變化，對(duì)其突變堿基對(duì)色氨酸的產(chǎn)量的影響進(jìn)行了初步研究。同源重組是基因工程實(shí)驗(yàn)中常用的技術(shù)手段，在基因打靶和基因克隆方面具有重要作用，而red（一種能夠應(yīng)用于大腸桿菌的基于λ噬菌體Red重組酶的同源重組系統(tǒng)）同源重組技術(shù)是利用red系統(tǒng)是一項(xiàng)可在染色體水平進(jìn)行遺傳操作的技術(shù)，只需要較短的同源序列而不需要特定的限制性酶切位點(diǎn)，即可完成。本課題以CRISPR為基本方法，采用同源重組技術(shù)利用cas9、ptarget兩種質(zhì)粒將突變型BL8菌的tnaB、talB、tyrA、gabD、gabT、lplA、ar
6、oF這些基因組基因片段替換到野生型BL8菌中。得到重組后的BL21野生菌后，首先進(jìn)行了重組菌與突變菌生長曲線的對(duì)比，而后又進(jìn)行了色氨酸產(chǎn)量的定量分析。最終發(fā)現(xiàn)重組菌與突變菌B8以及BL21的生長曲線并沒有比較明顯的差異，而最后lplA，talB色氨酸產(chǎn)量高于野生型B8菌低于突變型B8菌，表明lplA與talB的突變堿基對(duì)色氨酸的合成有促進(jìn)作用。關(guān)鍵詞：同源重組，B8，CRISPRAbstractMutagenesisisapowerfulmethodtoobtainingstrainswithexcellentperformance.However,
7、mutagenesiswillhaveglobaleffect,andinevitablyleadtounwantedmutationsonthestrainchromosome.Thisstudyaimedtoinvestigatetherelationshipbetweenchromosomemutationsandstrainperformance.WeusedartptomutateB8strainsandfoundsomemutationloci,thenartificiallyintroducedtheselociintowildtype
8、B8strainsviahomologousrecombination.Bycomparingthetryp
