甘草素誘導(dǎo)人肝癌smmc-7721細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究

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1、南索醫(yī)科大學(xué)碩：￡學(xué)位論文縮略語ROS，reactiveoxygenspecies；活性氧H202,hydrogenperoxide；過氧化氫GSH，glutathione；谷胱甘肽GSH—PX，glutathioneperoxidase；谷胱甘肽過氧化物酶SOD，superoxidedismutase；超氧化物歧化酶NAC，N．a(chǎn)cetyl，L—cysteine；N．乙酰半胱氨酸PBS，phospatebufferedsaline；磷酸鹽緩沖液FITC，AnnexinV-fluoresceinisothiocyanate；凋亡檢測(cè)試劑盒PI，propidiumiodide碘化丙啶3露窳醫(yī)

2、科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文鹽堇塞透昱厶匱癌S巡叢g=212蘭麴照凋圭丞基扭劐鯪盈巍是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他入或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對(duì)本研究的啟發(fā)和所做的貢獻(xiàn)均在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。專業(yè)：萱差墨盒星衛(wèi)生作者簽名：張馥日期：塑呈：笪：12論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復(fù)印手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名

3、：猛簍塑．導(dǎo)師簽名：囂主舀霞期：竺垡＆．，易南索囂科大學(xué)碩士學(xué)位論文甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的研究研究生張世蒴指導(dǎo)老師蔡云清指導(dǎo)小組王守林李愛萍南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，南京，210029中文摘要肝癌是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。肝癌的發(fā)生不僅與細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，亦與細(xì)胞凋亡的失衡存在密切關(guān)系。大量研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物具有抗腫瘤的作用，其機(jī)制主要是遺過抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和干預(yù)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的蛋白激酶等[11。甘草素是一種從甘草中提取的一種二氫黃酮單體化合物。國內(nèi)外研究報(bào)道甘草素具有多種生理活性作用，但有關(guān)甘

4、草素抗腫瘤作用的研究報(bào)道甚少。因此，本課題擬觀察甘草素對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，并通過檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白與酶活性的變化深入探討甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理，為進(jìn)一步研究甘草素的抗腫瘤作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。4南衷醫(yī)科大學(xué)頊?zhǔn)繉W(xué)位論文第一部分甘草素抑制腫瘤細(xì)胞生長及誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡的研究目的：探討甘草素(1iquiritigenin)對(duì)兩株腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用及對(duì)人肝癌SMMC。7721胞凋亡的誘導(dǎo)作用的影響。方法：本研究采用體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞和人肝癌SMMC．7721細(xì)胞的方法，通過噻唑藍(lán)(MTT)≥g色法觀察甘草素對(duì)腫

5、瘤細(xì)胞增殖的影響；Hoechst染色法和電鏡觀察甘草素誘導(dǎo)SMMC一7721細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化：流式細(xì)胞儀檢測(cè)甘草素誘導(dǎo)SMMC．7721細(xì)胞凋亡率的變化情況。結(jié)果：甘草素對(duì)Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞作用24、48和72h時(shí)各劑量組出現(xiàn)生長抑制作用，其最高抑制率分別為15．4％、57．1％和84．7％；對(duì)SMMC．7721肝癌細(xì)胞作用24、48和72h時(shí)，各劑量組都已出現(xiàn)生長抑制作用，最高抑制率分別達(dá)到85。6％、94．2％和91．3％，并呈現(xiàn)明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系。甘草素0。4mM作用SMMC．7721細(xì)胞12、24、48爭72h，Hoechst染色觀察可見細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染；透

6、射電鏡觀察可見0．4mM甘草素作用細(xì)胞72惦，細(xì)胞染色質(zhì)濃縮、空泡。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甘草素可誘導(dǎo)SMMC．7721細(xì)胞凋亡，并呈時(shí)間一劑量效應(yīng)關(guān)系，甘草素劑量no．6mM作用24垢，即可引拋3．52％的細(xì)胞發(fā)生凋亡。結(jié)論：甘草素對(duì)人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞和人肝癌SMMC．7721細(xì)胞的生長均有抑制作用，其中對(duì)SMMC。7721肝癌細(xì)胞的生長抑制作用更加明顯，并能誘導(dǎo)SMMC。7721肝癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵期甘草素；沁法；生長抑制；Hoechst染色；電鏡；人肝癌SMMC一7721細(xì)胞；細(xì)胞凋亡鬻索醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二部分研究甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721．細(xì)胞凋亡的氧化機(jī)制閣的

7、：探討甘草素誘導(dǎo)X．SMMC．7721肝癌細(xì)胞凋亡作用的氧化機(jī)制。方法：細(xì)胞經(jīng)氧化敏感的熒光染料2，7一二氫二氯熒光素∞CFH)和羅丹明123(RH-1231)染色后，用流式細(xì)胞儀分別測(cè)定細(xì)胞內(nèi)氧化水平(RoS)線粒體跨膜電位的變化；黃嘌呤氧化酶法測(cè)定sOD活襤，5’5’一二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法測(cè)定GSH和GSH．PXS-舌性；通過免疫印跡法測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白(p53、Bcl．2和survivin)的表達(dá)水平，采