甘草素誘導(dǎo)人肝癌smmc7721細(xì)胞凋亡及其機制的研究

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1、南索囂科大學(xué)碩士學(xué)位論文甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡及其機制的研究研究生張世蒴指導(dǎo)老師蔡云清指導(dǎo)小組王守林李愛萍南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，南京，210029中文摘要肝癌是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢。肝癌的發(fā)生不僅與細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，亦與細(xì)胞凋亡的失衡存在密切關(guān)系。大量研究發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物具有抗腫瘤的作用，其機制主要是遺過抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和干預(yù)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的蛋白激酶等[11。甘草素是一種從甘草中提取的一種二氫黃酮單體化合物

2、。國內(nèi)外研究報道甘草素具有多種生理活性作用，但有關(guān)甘草素抗腫瘤作用的研究報道甚少。因此，本課題擬觀察甘草素對腫瘤細(xì)胞增殖的影響及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡作用，并通過檢測凋亡相關(guān)蛋白與酶活性的變化深入探討甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡的分子機理，為進(jìn)一步研究甘草素的抗腫瘤作用機制提供科學(xué)依據(jù)。4南衷醫(yī)科大學(xué)頊?zhǔn)繉W(xué)位論文第一部分甘草素抑制腫瘤細(xì)胞生長及誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721細(xì)胞凋亡的研究目的：探討甘草素(1iquiritigenin)對兩株腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用及對人肝癌SMMC。7721

3、胞凋亡的誘導(dǎo)作用的影響。方法：本研究采用體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌Lovo細(xì)胞和人肝癌SMMC．7721細(xì)胞的方法，通過噻唑藍(lán)(MTT)≥g色法觀察甘草素對腫瘤細(xì)胞增殖的影響；Hoechst染色法和電鏡觀察甘草素誘導(dǎo)SMMC一7721細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化：流式細(xì)胞儀檢測甘草素誘導(dǎo)SMMC．7721細(xì)胞凋亡率的變化情況。結(jié)果：甘草素對Lovo結(jié)腸癌細(xì)胞作用24、48和72h時各劑量組出現(xiàn)生長抑制作用，其最高抑制率分別為15．4％、57．1％和84．7％；對SMMC．7721肝癌細(xì)胞作用24、48和72h時，各

4、劑量組都已出現(xiàn)生長抑制作用，最高抑制率分別達(dá)到85。6％、94．2％和91．3％，并呈現(xiàn)明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系。甘草素0。4mM作用SMMC．7721細(xì)胞12、24、48爭72h，Hoechst染色觀察可見細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染；透射電鏡觀察可見0．4mM甘草素作用細(xì)胞72惦，細(xì)胞染色質(zhì)濃縮、空泡。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甘草素可誘導(dǎo)SMMC．7721細(xì)胞凋亡，并呈時間一劑量效應(yīng)關(guān)系，甘草素劑量no．6mM作用24垢，即可引拋3．52％的細(xì)胞發(fā)生凋亡。結(jié)論：甘草素對人結(jié)腸癌Lovo細(xì)

5、胞和人肝癌SMMC．7721細(xì)胞的生長均有抑制作用，其中對SMMC。7721肝癌細(xì)胞的生長抑制作用更加明顯，并能誘導(dǎo)SMMC。7721肝癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵期甘草素；沁法；生長抑制；Hoechst染色；電鏡；人肝癌SMMC一7721細(xì)胞；細(xì)胞凋亡鬻索醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第二部分研究甘草素誘導(dǎo)人肝癌SMMC．7721．細(xì)胞凋亡的氧化機制閣的：探討甘草素誘導(dǎo)X．SMMC．7721肝癌細(xì)胞凋亡作用的氧化機制。方法：細(xì)胞經(jīng)氧化敏感的熒光染料2，7一二氫二氯熒光素∞CFH)和羅丹明123(RH-1231)

6、染色后，用流式細(xì)胞儀分別測定細(xì)胞內(nèi)氧化水平(RoS)線粒體跨膜電位的變化；黃嘌呤氧化酶法測定sOD活襤，5’5’一二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)法測定GSH和GSH．PXS-舌性；通過免疫印跡法測定凋亡相關(guān)蛋白(p53、Bcl．2和survivin)的表達(dá)水平，采用酶標(biāo)法檢鋇qcaspase．3酶的活性。結(jié)果：0．4raM甘草素作用SMMC．7721細(xì)胞后出現(xiàn)ROS積聚，作用3h時，ROS已“現(xiàn)顯著升高，并且呈現(xiàn)時間效應(yīng)關(guān)系，作用9h達(dá)到最高峰；預(yù)先ha／kNAC作用30min后再加入甘草素，發(fā)

7、現(xiàn)NAC*-]"抑制細(xì)胞凋亡和細(xì)胞ROS的產(chǎn)生；同時，隨著作用時間的延長，線粒體膜電位不斷下降，在作用9h和12h時出現(xiàn)顯著下降；細(xì)胞肉抗氧化酶SOD、GSH和GSH-PX：；@性均在甘草素作用后出現(xiàn)持續(xù)下降；0．4mM甘草素作髑0、12、24、48和72骺，凋亡相關(guān)蛋白p53和Bcl。2表迭水平分別呈時間依賴性上調(diào)和下調(diào)，survivin蛋白和procaspase一3表達(dá)下調(diào)，caspase。3活性上升。結(jié)論：甘草素誘導(dǎo)SMMC．7721肝癌細(xì)胞凋亡的機制可能與其促氧化機制有關(guān)。關(guān)鍵詞甘草素；

8、ROS；線粒體膜電位；抗氧化酶；p．53蛋白；Bcl。2蛋白；survivin蛋白；caspase一3酶；NAC6青索醫(yī)科丈學(xué)碩士學(xué)位論文o?！弧瘛觥瘛瘛馢●●●1■●Study0nmechanisms0lapoptosisliqUlrltIgenln—lndUCecIlnHumanhepatocellularcarcinomaSMMC一7721cellsPostgraduateZhangShipingSupervisorCaiYunqingDirectorsWangShoulin，LiAi