雌激素對大鼠急性脊髓損傷后bcl-2、bax基因表達及細胞凋亡的實驗研究

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1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師(或指導(dǎo)小組)的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。一躲力姥一名妻窖一河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表

2、或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負。研究生簽名：／歐為礱導(dǎo)師簽名：荽戶?壇惡>和渾之月>擴日中文摘要雌激素對大鼠急性脊髓損傷后BCL．2、BAX基因表達及細胞凋亡的實驗研究摘要目的：研究雌激素對急性脊髓損傷后脊髓組織BCL．2、BAX基因表達及細胞凋亡的影響。方法：140只成年雄性SD大鼠隨機分為：空白組14只，損傷組42只，雌激素藥物組42只和甲基強的松龍藥物組42只，每組包括lh、4h、8h、ld、3d、5d、7d共7個時間點，空白組每點2只SD大鼠，其余組每點各有6只SD大鼠。按改

3、良Allen’S撞擊法致傷力為509cf(109x5cm)損傷T9．T10制作動物模型，大鼠用10％水合氯醛麻醉，無菌條件下以T9一T10為中心做后正中切口，咬除T9一T10棘突及椎板，空白組只暴露脊髓，不損傷脊髓，給予相同劑量生理鹽水，損傷組術(shù)后30分鐘經(jīng)大鼠尾靜脈給予等量生理鹽水。雌激素藥物組術(shù)后30分鐘經(jīng)大鼠尾靜脈給予苯甲酸雌二醇[100ug／kg]，每天一次，甲基強的松龍藥物組術(shù)后30分鐘經(jīng)大鼠尾靜脈給予靜注大劑量甲基強的松龍(30mg／kg)，在各個亞組內(nèi)至少有6只動物，不足的應(yīng)及時補充。分別在各時間點處死動物，經(jīng)

4、心臟灌注取材，標(biāo)本經(jīng)梯度脫水，浸蠟，石蠟包埋，制成6微米厚切片，通過對SCI部位標(biāo)本進行HE染色觀察鏡下?lián)p傷部位脊髓的病理形態(tài)，同時對受損脊髓部位進行免疫組織化學(xué)檢測神經(jīng)細胞凋亡因子BCL一2和BAX基因的表達及用原位末端標(biāo)中文摘要記法(Tu妊L法)標(biāo)記神經(jīng)元凋亡細胞，觀察雌激素、甲基強的松龍對大鼠SCI的神經(jīng)保護作用。結(jié)果：(1)BCL．2在空白組各時間點均未見陽性細胞表達，損傷組和各藥物治療組(Table一3)在SCI傷后4h，損傷部位開始出現(xiàn)較明顯的表達，傷后8h數(shù)量增加，傷后24h達高峰(BCL．2平均光密度值分別為

5、：損傷組0．273+0．043；雌激素組O．396士0．052；甲強龍組O．395+0．057)，分布范圍擴至周圍正常組織，傷后3d開始有減少(BCL．2平均光密度值分別為：損傷組0．207+0．050；雌激素組0．308+0．046；甲強龍組0．301-4-0．041)，傷后1周基本上只有微弱的陽性表達。BCL．2陽性細胞胞質(zhì)著黃色(Fig．10、)，神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞均有明顯表達(Fig．11)。統(tǒng)計分析結(jié)果示雌激素組和甲基強的松龍組BCL．2蛋白表達(平均光密度值)比損傷組在相同時間點有明顯差異(P

6、和甲基強的松龍組BCL．2蛋白表達在相同時間點無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O．05)，各組內(nèi)24h時間點較其它點BCL．2蛋白表達均有明顯差異(P

7、AX平均光密度值分別為：損傷組0．191+0．078；雌激素組0．151+0．05l；甲強龍組中文摘要0．1644-0．070．)，傷后7d表達基本趨于傷前水平。BAX陽性細胞胞質(zhì)著棕黃色(Fig．16)，灰質(zhì)中神經(jīng)元細胞，白質(zhì)中膠質(zhì)細胞均有大量陽性細胞表達。高倍鏡下可見陽性細胞部分呈凋亡形態(tài)，陽性信號主要位于胞漿內(nèi)。圖象分析系統(tǒng)分析結(jié)果顯示雌激素藥物組較損傷組BAX蛋自表達明顯減少，統(tǒng)計分析結(jié)果示雌激素組和甲基強的松龍組BAX蛋白表達比損傷組在同～時間點有明顯差異(P

8、同時間點無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，各組內(nèi)24h時間點較其它點BAX蛋白表達均有明顯差異(P空白組零星可見TUNEL陽性細胞，損傷組及藥物治療組均可見大量TUNEL陽性細胞，灰質(zhì)、白質(zhì)內(nèi)均可見，脊髓損傷后4h時陽性細胞較為稀疏，8h，1d和