凍干甲型肝炎減毒活疫苗

《凍干甲型肝炎減毒活疫苗》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。

1、凍干甲型肝炎減毒活疫苗DongganJianxingGanyanJianduHuoyimiaoHepatitisAVaccine（Live），F(xiàn)reeze-dried本品系用甲型肝炎(簡稱甲肝)病毒減毒株接種人二倍體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、收獲、提純病毒、加入適宜穩(wěn)定劑后凍干制成，用于預(yù)防甲型肝炎。1基本要求生產(chǎn)和檢定用設(shè)施、原材料及輔料、水、器具、動物、等應(yīng)符合“凡例”有關(guān)要求。2制造2.1生產(chǎn)用細(xì)胞生產(chǎn)用細(xì)胞為人二倍體細(xì)胞（2BS株、KMB17株或其他批準(zhǔn)的細(xì)胞株）。2.1.1細(xì)胞庫管理及檢定應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)和檢定用動物細(xì)胞基質(zhì)制

2、備及檢定規(guī)程”規(guī)定。取自同批工作細(xì)胞庫的1支或多支細(xì)胞管,經(jīng)復(fù)蘇擴(kuò)增后的細(xì)胞僅用于一批疫苗的生產(chǎn)。2BS株原始細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第14代，主細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第31代，工作細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第44代。KMB17株原始細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第6代，主細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第15代，工作細(xì)胞庫細(xì)胞代次應(yīng)不超過第45代；2.1.2細(xì)胞制備取工作細(xì)胞庫中的1支或多支細(xì)胞管，復(fù)蘇后混合培養(yǎng)，成單層后，用適宜濃度的胰蛋白酶消化，置37±0.5℃靜置或旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。2.2毒種2.2.1名稱及來源生產(chǎn)用毒種為甲型肝炎病毒H2或L－A－1

3、減毒株。2.2.2種子批的建立應(yīng)符合“生物制品生產(chǎn)和檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定。H2減毒株原始種子批傳代應(yīng)不超過第7代，主種子批應(yīng)不超過第8代，工作種子批應(yīng)不超過第14代，生產(chǎn)的疫苗病毒代次應(yīng)不超過第15代；L－A－1株原始種子批傳代應(yīng)不超過第17代，主種子批應(yīng)不超過第18代，工作種子批應(yīng)不超過第26代，生產(chǎn)的疫苗病毒代次應(yīng)不超過第27代。2.2.3種子批檢定主種子批應(yīng)進(jìn)行以下全面檢定，工作種子批應(yīng)至少進(jìn)行2.2.3.1-2.2.3.4項檢定。2.2.3.1鑒別試驗用甲型肝炎病毒特異高效價免疫血清與500~1000CCID50／

4、ml甲型肝炎病毒等量混合，置37℃水浴60分鐘，接種人二倍體細(xì)胞，置35℃培養(yǎng)至病毒增殖高峰期，提取甲型肝炎病毒后用酶聯(lián)免疫法測定，經(jīng)中和的培養(yǎng)物檢測結(jié)果應(yīng)為陰性（證明甲型肝炎病毒應(yīng)完全中和），未經(jīng)中和的病毒液檢測結(jié)果應(yīng)為陽性（應(yīng)證明為甲型肝炎病毒）。2.2.3.2病毒滴定將毒種作10倍系列稀釋，取至少3個稀釋度，分別接種人二倍體細(xì)胞，置35℃培養(yǎng)至病毒增殖高峰期，收獲后提取甲型肝炎病毒，用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行病毒滴定，病毒滴度應(yīng)不低于6.50LgCCID50/ml。2.2.3.3無菌檢查依法檢查（附錄XⅡA），應(yīng)符合規(guī)定。2.２.３

5、.4支原體檢查依法檢查（附錄XⅡB），應(yīng)符合規(guī)定。2.2.3.5病毒外源因子檢查依法檢查（附錄XⅡC），應(yīng)符合規(guī)定。供試品可不經(jīng)甲型肝炎病毒抗特異性免疫血清中和，直接接種小鼠觀察。2.2.3.6免疫原性檢查用主種子批制備原疫苗，按常規(guī)接種甲型肝炎易感者至少40名，分別于免疫前及免疫后6~8周采血，血清抗體陽轉(zhuǎn)率應(yīng)不低于90%。2.2.3.7猴體安全及免疫原性試驗用主種子批制備的疫苗做猴體試驗。取甲型肝炎病毒抗體陰性、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶指標(biāo)正常、體重為1.5-4.5kg的健康恒河猴或紅面猴5只，于下肢靜脈注射疫苗1.0ml，滴度應(yīng)不

6、低于6.50LgCCID50／ml。試驗猴于第0、4、8周肝穿刺做組織病理檢查。于第0周、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周采血測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及甲型肝炎病毒抗體。應(yīng)設(shè)2只猴為陰性對照。試驗組符合下列情況者判定合格：（1）至少4只猴抗體陽轉(zhuǎn)；（2）血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶有一過性（1周次）升高者不超過2只猴；（3）肝組織無與接種供試品有關(guān)的病理改變。有下列情況之一者可重試：（1）接種猴抗體陽轉(zhuǎn)率低于4／5；（2）抗體陽轉(zhuǎn)前后兩周內(nèi)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶異常升高超過2次；（3）試驗猴不能排除其他原因所致的肝組織病理改變。重試后仍

7、出現(xiàn)上述情況之一者，判為不合格。2.2.4毒種保存毒種應(yīng)置-60℃以下保存。2.3原液2.3.1細(xì)胞制備同2.1.2項。2.3.2培養(yǎng)液培養(yǎng)液為含適量滅能新生小牛血清的MEM或其他適宜培養(yǎng)液。新生牛血清的質(zhì)量應(yīng)符合規(guī)定（附錄XIIID），且甲肝抗體檢測應(yīng)為陰性。2.3.3對照細(xì)胞外源因子檢查依法檢查（附錄XⅡC），應(yīng)符合規(guī)定。2.3.4病毒接種和培養(yǎng)取工作種子批毒種按適宜MOI接種于人二倍體細(xì)胞（同一工作種子批應(yīng)按同一MOI接種），于35±0.5℃培養(yǎng)，培養(yǎng)期間，根據(jù)細(xì)胞生長情況，可用不少于原倍培養(yǎng)液量的洗液充分洗滌細(xì)胞表面以去

8、除牛血清，并換加維持液或其他適宜的液體繼續(xù)培養(yǎng)。2.3.5病毒收獲物于病毒增殖高峰期，采用適宜濃度的胰蛋白酶或其他適宜方法消化含甲肝病毒的細(xì)胞，并經(jīng)離心或其他適宜的方法收集含甲肝病毒的細(xì)胞為病毒收獲物。2.3.6病毒收獲物檢定按3.1項進(jìn)行。2.3.7病毒收獲物