db33-t 625.3-2007 無公害豆芽 第3部分：6－芐基腺嘌呤殘留量和4－氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定

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1、DB33/T××××.3—2006浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布2007-03-05實施2007-02-05發(fā)布無公害豆芽第3部分：6－芐基腺嘌呤殘留量和4－氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定DB33/T625.3—2007DB33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS67.050C53備案號：1DB33/T625.3—2007前言DB33/625－2007《無公害豆芽》分為三個部分：——第1部分：生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程；——第2部分：質(zhì)量安全要求；——第3部分：6-芐基腺嘌呤殘留量和4-氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定。本部分為DB33/625－2007《

2、無公害豆芽》第3部分。本部分的附錄A和附錄B為資料性附錄。本部分起草單位：浙江省疾病預(yù)防控制中心、寧波市疾病預(yù)防控制中心、杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測院、浙江省農(nóng)業(yè)廳農(nóng)作物管理局、寧波市衛(wèi)生監(jiān)督所、寧波市五龍?zhí)妒卟耸称酚邢薰尽幉ㄊ匈|(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局。本部分主要起草人：李小平、韓見龍、蔡增軒、金米聰、趙建陽、芮昶、蔣經(jīng)偉、陶禮明、戴建剛。IDB33/T625.3—2007無公害豆芽第3部分：6－芐基腺嘌呤殘留量和4－氯苯氧乙酸鈉殘留量的測定第一法豆芽中6-芐基腺嘌呤殘留量的測定——LC-MS/MS法1　范圍本方法規(guī)

3、定了豆芽中6-芐基腺嘌呤的測定方法。本方法適用于豆芽中6-芐基腺嘌呤的測定。本方法檢出限為1×10-6mg/kg。2　原理豆芽中殘留的6-芐基腺嘌呤經(jīng)酸化甲醇提取，反相柱分離，電噴霧離子化（ESI）和多離子反應(yīng)監(jiān)測（MRM）方式進(jìn)行定量測定。以試樣峰的保留時間、母離子（m/z:226.20[M+H]+）與子離子(226.20>91.0,226.20>147.90)定性，以子離子(226.20>91.0)峰面積外標(biāo)法定量。3　試劑除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑、蒸餾水或去離子水。3.1　乙酸。3.2　乙腈（H

4、PLC）。3.3　甲醇（HPLC）。3.4　50%的甲醇水溶液。3.5　酸化甲醇：每100mL甲醇中加入乙酸50μL，混勻。3.6　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：3.6.1　標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液精密稱取6-芐基腺嘌呤（含量＞98.0％）0.1000g于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。此標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg6-芐基腺嘌呤。標(biāo)準(zhǔn)使用液用甲醇稀釋至每毫升含1μg的6-芐基腺嘌呤。在4℃冰箱中儲存，有效期1個月。3.6.2　標(biāo)準(zhǔn)工作溶液3.6.2.1　空白豆芽萃取液制備選擇在生產(chǎn)過程中未添加6

5、-芐基腺嘌呤的豆芽菜。按5.1試樣處理方法提取，經(jīng)0.22μm有機(jī)濾膜過濾。必要時使用LC-MS/MS分析，以確定在6-芐基腺嘌呤出峰處不存在干擾。3.6.2.2　標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列配制準(zhǔn)確吸取標(biāo)注使用液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL于進(jìn)樣瓶中，加空白豆芽萃取液（3.6.2.1）至1mL。配制成濃度依次為1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、6ng/mL、8ng/mL、10ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，供LC-MS/MS分析。4　儀器4.1　組織搗碎機(jī)。7DB33/T625.3—20071.

6、1　天平（精度0.01和0.0001g）。1.2　高效液相色譜-電噴霧-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜（LC-ESI-MS/MS）。1.3　均質(zhì)機(jī)（速度范圍：6,000－24,000rpm）。1.4　離心機(jī)(最高轉(zhuǎn)速:15,000RPM)。2　分析步驟2.1　試樣處理稱取豆芽樣品500g用食物粉碎機(jī)粉碎后，取5g樣品（精確至0.01g）于50mL聚丙烯離心管中，加入10mL酸化甲醇，用均質(zhì)機(jī)勻質(zhì)3min,10000rpm離心10min，上清液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，樣品再用10mL酸化甲醇重復(fù)提取一次。合并上清液，用水定容至

7、刻度，搖勻，吸取2mL于10容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.2μm濾膜過濾，供LC-MS/MS分析。2.2　色譜參考條件色譜柱：WatersSunFireC18柱（2.1mm×150mm，5μm顆徑）。流動相A：水（0.1%甲酸）。流動相B：甲醇（0.1%甲酸）。流速：0.30mL/min。進(jìn)樣量：10uL。柱溫：35℃。表1梯度洗脫條件時間（min）流動相A流動相B變化曲線0.0050%50%3.0044%56%63.250%0%64.250%0%14.5050%50%68.0050%

8、50%1注：變化曲線：1為立即變化，6為線性變化2.3　質(zhì)譜參考條件離子化方式ESI+。毛細(xì)管電壓(kV)3.00。錐孔電壓(V)57。RFLens135.0。Aperture(V)0.0。RFLens20.3。源溫度(℃)120。脫溶劑溫度(℃)350。錐孔反吹氣流(L/Hr)50。脫溶劑氣流(L/Hr)454。LM1Resolution12.0。HM1Resolution12.0。離子能量10.5。LM2Re