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《正交試驗(yàn)優(yōu)選蝸牛多糖提取工藝的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。
1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果正交試驗(yàn)優(yōu)選蝸牛多糖提取工藝的研究作者：湛孝東王克霞李朝品【摘要】目的：探討蝸牛多糖的最佳提取工藝。方法：運(yùn)用正交試驗(yàn)對(duì)浸體時(shí)間、溫度、料液比和乙醇濃度4個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果：蝸牛多糖提取條件的最優(yōu)組合為：浸提時(shí)間6h、浸提溫度70℃、料液比1︰30和乙醇濃度90%。結(jié)論：優(yōu)選的蝸牛多糖提取工藝穩(wěn)定可行，能有效提高蝸牛多糖得率?！娟P(guān)鍵詞】正交試驗(yàn)蝸牛多糖提取優(yōu)選多糖是廣
2、泛存在于有機(jī)體內(nèi)的一種重要信息分子的受體，它參與分子識(shí)別、細(xì)胞黏附以及機(jī)體防御等過(guò)程的調(diào)節(jié)，使多糖具有抗病毒、抗腫瘤、免疫增強(qiáng)、降血糖、抗凝血和抗衰老等多種生物學(xué)活性。此外，多糖大多提取于動(dòng)植物，是一類(lèi)毒副作用小的天然藥物，因此受到廣泛關(guān)注。我們發(fā)現(xiàn)蝸牛多糖具有抗病毒和增強(qiáng)免疫等活性[1～2]。但目前的蝸牛多糖提取工藝存在得率較低的缺點(diǎn)，我們采用正交試驗(yàn)的方法對(duì)現(xiàn)有工藝進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果報(bào)道如下。1材料與方法試劑和議器試劑：無(wú)水乙醇、氯仿、正丁醇、苯酚、葡萄糖等，以上試劑均為分析純。儀器：恒溫磁力攪拌器
3、，國(guó)華電器；電子天平，瑞士Metller；真空干燥箱，上海一恒；UV1600紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津。課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果實(shí)驗(yàn)方法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)參照預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)資料，選取浸體時(shí)間、溫度、料液比和乙醇濃度4個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，采用L9正交表，見(jiàn)表1。表1因素水平表多糖提取
4、新鮮活體條華蝸牛，去殼，清水洗凈干燥后精確稱(chēng)取200g，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素水平，參考文獻(xiàn)方法[3]，提取蝸牛多糖。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及多糖含量測(cè)定采用苯酚-硫酸比色法，操作步驟如下；精密稱(chēng)取105℃下干燥至恒重的葡萄糖60mg，置100ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，即為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。精密吸取上述溶液、、、、和，分別置于50ml容量瓶中，加蒸餾水定容。精密吸取上述溶液各，置試管中，然后各管加入5%苯酚1ml，搖勻后迅速加入濃硫酸7ml，5min后置40℃水浴中加熱30min，取出置冰水浴5min。
5、以同樣處理的蒸餾水作空白。490nm處測(cè)定吸光度A。以A值為縱坐標(biāo)，以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 根據(jù)蝸牛多糖吸光度及標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出蝸牛多糖濃度，并計(jì)算得出其含量。結(jié)果.1正交試驗(yàn)結(jié)果不同浸體時(shí)間、溫度、料液比和乙醇濃度正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。.直觀分析課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須
6、有創(chuàng)新性的成果從表2可以直觀看出浸體時(shí)間、溫度、料液比和乙醇濃度對(duì)蝸牛多糖得率都有影響，主次因素順序?yàn)椋篈＞B＞D＞C。蝸牛多糖提取條件的最優(yōu)組合為：A2B2D3C3，即浸提時(shí)間6h、浸提溫度70℃、乙醇濃度90%和料液比1︰30。.方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。表正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析方差分析的結(jié)果表明，浸提時(shí)間和浸提溫度對(duì)多糖的得率有顯著性影響。.2標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及多糖含量不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液對(duì)應(yīng)的吸光度A值分別為、、、、和。計(jì)算出的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：A=－，r=。根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算出
7、蝸牛多糖含量的平均值為%。.3驗(yàn)證試驗(yàn)精密稱(chēng)取蝸牛3份，每份200g，以上述蝸牛多糖最佳提取工藝進(jìn)行提取。測(cè)得蝸牛多糖含量平均值為%，RSD=%，驗(yàn)證結(jié)果說(shuō)明該工藝穩(wěn)定可行。討論 在正交設(shè)計(jì)優(yōu)選提取條件中，我們得出的最佳乙醇濃度為90%，但是考慮到提取成本的因素，我們實(shí)際使用的乙醇終濃度為70%，然后通過(guò)反復(fù)多次沉淀。這既節(jié)約了成本又提高了多糖純度，效果較理想?！‖F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的多糖提取方法課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對(duì)實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?jì)。從
8、本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價(jià)值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見(jiàn)解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果大多為植物多糖和菌類(lèi)多糖，這類(lèi)多糖的共同特點(diǎn)是成份單一，水溶性較好，因此提取過(guò)程較為簡(jiǎn)單。但蝸牛多糖大部分為蛋白多糖，因此分離較困難，這是蝸牛多糖得率不高的主要原因。此外動(dòng)物多糖往往還含有脂類(lèi)，脫脂是否完全直接影響多糖的純度和得率。本研究參考其他貝類(lèi)多糖的提取方法，采用甲醇溫和脫脂的方法，避免了對(duì)多糖結(jié)構(gòu)的破壞，取得了較好效
