正交實驗設(shè)計優(yōu)選薺菜多糖的提取工藝研究

《正交實驗設(shè)計優(yōu)選薺菜多糖的提取工藝研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、正交實驗設(shè)計優(yōu)選薺菜多糖的提取工藝研究：許瑞波，毛茜王吉劉瑋煒陳小芳唐秋萍馬衛(wèi)興【摘要】目的研究薺菜多糖的提取工藝條件。方法以薺菜多糖的提取率為考察指標(biāo)，以水為提取劑，采用單因素和正交實驗設(shè)計考察了浸提溫度、料液比、浸提時間、超聲提取時間和提取次數(shù)等因素對薺菜多糖提取率的影響。結(jié)果薺菜多糖的最適宜提取工藝條件是：熱水浸提溫度為70℃，料液比(原料粉質(zhì)量g∶蒸餾水體積ml)為1∶20，熱水浸提時間為3h，然后超聲提取30min，提取3次，此時薺菜多糖的提取率為2.64%。所得粗多糖經(jīng)Sevag法脫蛋白處理后，其UV掃描圖中260～280nm處的吸收峰明顯減小，說明該法可以

2、較好的脫除產(chǎn)品中的核酸、蛋白質(zhì)。結(jié)論該實驗為薺菜多糖的提取、純化提供了一定的理論依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】薺菜;多糖;提取;超聲輔助法　薺菜Capsellabursa-pastorisL.又名護(hù)生草、薺菜花等，屬十字花科1年或2年生草本植物，共二百余屬，二千余種，全草均可入藥。薺菜廣泛生長于田野、路邊及庭院，全國各地均有栽培，是藥食同源植物[1～5]?！侗静菥V目》《現(xiàn)代食用中藥》等記載，薺菜有清肝明目、涼血止血、和中、補心脾、殺諸毒之功，這些功能主要歸因于其所含的多種天然活性成分:維生素、礦質(zhì)元素、氨基酸、生物堿、黃酮類等[4～7]?！　‰m然我國薺菜資源豐富，但對其活性成分的提取

3、、利用研究并不多。本課題組已經(jīng)先后對薺菜所含的氨基酸、黃酮類化合物、生物堿等成分[6～9]進(jìn)行了提取工藝研究，并獲得了適宜的提取工藝條件。此外，由于多糖具有多種生物活性，且毒性低，使其在抗體、腫瘤治療、艾滋病、抗衰老、治療糖尿病等臨床應(yīng)用方面具有良好的前景[10]。為了進(jìn)一步有效的開發(fā)、利用該資源，本文利用單因素和正交實驗設(shè)計對薺菜多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，得到了適宜的提取條件?！　?材料與儀器　　1.1原料薺菜于2007年春天購于連云港市菜市場,摘去爛、黃葉，用自來水沖洗干凈，經(jīng)風(fēng)干后，在真空干燥箱中60℃恒溫完全烘干，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，密封備用?！　?.2試劑苯酚(用前

4、蒸餾純化),硫酸,石油醚，氯仿，正丁醇(均為分析純)，95%乙醇，蒸餾水?！　?.3儀器KS-150D型超聲波清洗機(jī)(寧波科生儀器廠)，HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋(武漢精華科教儀器有限公司)，UV-2550紫外分光光度計(日本島津)，JH723可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)。　　2方法　　2.1薺菜多糖提取操作步驟準(zhǔn)確稱取10.00g干燥的薺菜粉末，放入三口燒瓶中，并向該三口燒瓶中加入50ml石油醚(去除色素等物質(zhì))，于水浴中加熱回流一定的時間，過濾，將濾渣置于盛有100ml80%乙醇的三口燒瓶中，回流提取2次(除去小分子糖類、苷類、生物堿等醇溶性物質(zhì)，防止其成

5、為水溶性多糖中的雜質(zhì))，每次1.5h，再過濾。將濾渣置于三口燒瓶中，加入一定量的蒸餾水，提取一定時間，再用超聲波清洗器超聲提取一定時間，然后抽濾得清液，即薺菜多糖提取液?！　?.2薺菜多糖的脫蛋白操作步驟將薺菜多糖提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮至50ml左右，移入分液漏斗，然后加入氯仿與正丁醇(V∶V=4∶1)混合液，使?jié)饪s液與混合液的體積比約為3∶1，充分搖振、靜置分層，除去白色沉淀層，重復(fù)此操作2次。用量筒量取脫蛋白后的多糖溶液的體積，記為V。再用移液管移取1.00ml此液，置于25ml容量瓶中定容，即為待測液。然后在剩余多糖提取液中加入其4倍體積的95%乙醇，靜置12

6、h后，過濾，將濾渣放入烘箱中于60℃烘干至恒重，得精制純化多糖?！　?.3多糖含量的測定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，用苯酚-硫酸比色法測多糖[10]的含量。參考文獻(xiàn)[10]制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程A=4.2229C+0.0190，相關(guān)系數(shù)r=0.9991，C是濃度(mg/ml)?！　?.4薺菜多糖提取率的計算方法本實驗未考察醇沉?xí)r，醇用量、醇沉?xí)r間等因素對多糖析出量的影響，因此為了準(zhǔn)確反應(yīng)實驗所用方法對薺菜多糖的提取效果，以醇沉前溶液中薺菜多糖的含量為準(zhǔn)，即精密吸取1ml“2.2”中定容的待測液，再按照“2.3”項方法測薺菜多糖的含量，即：薺菜多糖提取率(%)

7、=薺菜多糖質(zhì)量÷原料質(zhì)量×100%=(A-0.0190)×V1689.16×100%其中：A為所測得的吸光度，V為“2.2”項中所量得的多糖液體積?！　?結(jié)果與討論　　3.1單因素實驗結(jié)果　　3.1.1料液比對薺菜多糖提取率的影響提取溫度為80℃，浸提2h，提取1次，考察料液比(1∶10，1∶20，1∶30，1∶40)對提取率的影響(見圖1)。由圖1可知。隨著料液比的增大，薺菜多糖提取率也逐漸增加，當(dāng)料液比為1∶30時最大，再增大料液比，提取率反而減少，因此最適宜料液比在1∶30左右。圖1料液比對提取率的影響　　3.1.2浸提溫度對薺菜多