產淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定

《產淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、2011屆本科畢業(yè)論文（設計）產淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定姓名：___________系別：__生命科學學院____專業(yè)：___生物技術10-1___學號：____100914051_____指導教師：___________2012年10月31日產淀粉酶芽孢桿菌的篩選1實驗意義從環(huán)境中采集樣品并從中分離純化出能產生淀粉酶的芽孢桿菌，用于后期發(fā)酵。2實驗器材2.1土樣:實驗前三天在土壤5-8cm處埋饅頭，實驗前一天2.2培養(yǎng)基的配方：篩選培養(yǎng)基:淀粉10.0g，酵母膏2.50g，蛋白胨5g，Na2HPO42.50g，MgSO4·7H2

2、O0.05g，NaCl0.05g，瓊脂10.0g，水500mL，pH7.0－7.42.3器材：40個培養(yǎng)皿、酒精燈、接種環(huán)、14個試管、5個三角瓶（250ml）、涂布棒、移液管、恒溫水浴鍋、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、超凈工作臺2.4試劑2.4.1淀粉酶活力測定：碘液2.4.2革蘭氏染色：盧戈氏碘液、95%乙醇、香柏油、乙醇乙醚3實驗步驟3.1培養(yǎng)基的制備及其儀器的滅菌3.1.1量取500ml水，按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取淀粉（先將淀粉用水攪成糊狀）、酵母膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中，加少量水熔解,再加入瓊脂加熱溶化，不行攪拌，最

3、后補充水分，分裝入試管內或三角燒瓶內，加塞包扎。3.1.2試管中倒培養(yǎng)基約3ml，再和剩余培養(yǎng)基、平板、移液管用報紙包扎好，于121℃，30分鐘高壓蒸汽滅菌。3.1.3倒平板將滅菌的培養(yǎng)基冷至50℃左右，在超凈工作臺上，試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。三角瓶中的培養(yǎng)基倒平板，約10ml，靜置待用。4.1產淀粉酶菌株的分離、純化41.1采集土壤樣本：用塑料袋在預處理處取樣4.1.2稀釋稱取土樣5g，放入盛有45ml無菌水三角瓶中，使土樣和水充分混合加玻璃珠，搖約10分鐘，制成土壤懸浮液。然后將菌懸液置于

4、80℃水浴鍋中，20min。用一只無菌吸管吸取0.5ml土壤懸浮液加入盛有4.5ml含有無菌水的試管中充分混勻，此為10-1稀釋液，依此稀釋10-2、10-3、10-4、10-5幾種稀釋度的土壤溶液，分別編號為1、2、3、4、5。4.2.1初步篩選4.2.1.1用稀釋樣品的不同吸管分別依次從10-5、10-4、10-3樣品稀釋液中，吸取0.2mL于冷卻凝固的平板上（每個梯度重復兩次），用涂布棒涂抹均勻。記好編號。倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時。4.2.1.2培養(yǎng)24小時后，取出平板，挑取6株菌落（對光觀察菌落旁有小透明圈或表面光滑的

5、菌落），分別為1、2、3、4、5、6，進行三區(qū)劃線培養(yǎng)24h。再在挑取菌落的旁邊注入1-2ml碘液，觀察其透明圈，因淀粉遇碘變藍色，如菌落周圍有透明圈，說明該菌能產生淀粉酶使其水解。記下菌株號1、2、3、4、6。觀察透明圈一號菌株最大。4.3.1分離純化在劃線的平板中挑取形態(tài)大小相似的菌落，進行斜面劃線培養(yǎng)24h，并保存。4.3.2挑取斜面上的菌落，點種到平板中，一平板中接3種不同編號的（，大小盡量一致，寫上相應的編號），123號于一個平板，146于一個平板中，分別接3次，培養(yǎng)24h，48h、60h。4.3.3將上述不同時段平板中3

6、種不同單菌落挑取，進行盧戈碘液染色觀察其形態(tài)和芽孢。4.3.3.1涂片：用牙簽沾取少量菌體，涂在洗凈的載玻片上4.3.3.2染色：滴一滴盧戈碘液于菌體上，染色一分鐘，在水龍頭下慢慢沖洗染液。4.3.33鏡檢：先用低倍觀察，再用油鏡滴加香柏油觀察染色結果。菌體周圍為紫色，內部有小部分無色，為芽孢。最后用乙醚乙酯擦凈鏡頭。觀察結果：24h菌體較小，基本無芽孢。48h后觀察菌體形態(tài)較大，可以看清有芽孢的1和3號。60h后染色觀察，菌體變大了。1和3及4號可見芽孢。4.4高活力淀粉酶菌株的篩選：每染過一次后，就在菌落的周圍滴加碘液，用尺子量

7、取淀粉水解圈直徑數(shù)據(jù)如下：12346124h10mm無12mm5mm無無48h無8mm14mm12mm10mm19mm60h無無17mm11mm13mm22mm數(shù)據(jù)分析：“無”可能由于接種環(huán)過熱殺死了菌體；還有菌體較小基本無透明圈產生。有數(shù)據(jù)可知1號菌株生長較好，且透明圈最大。5、菌種保藏?將初步鑒定好的菌種斜面培養(yǎng)基試管收起，在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。