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《武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司畢業(yè)實(shí)習(xí)報(bào)告》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、做自己喜歡做的工作，你會(huì)覺(jué)得每天都是開(kāi)心的?！趷?ài)博泰克實(shí)習(xí)階段實(shí)習(xí)單位：武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司實(shí)習(xí)崗位：生產(chǎn)部克隆組實(shí)驗(yàn)員實(shí)習(xí)時(shí)間：2011年10月—2012年5月一、抗體行業(yè)的發(fā)展及未來(lái)前景19世紀(jì)末，白喉毒素的發(fā)現(xiàn)宣告第一代抗體誕生，隨著現(xiàn)代免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，第二代抗體-單克隆抗體、第三代抗體－基因工程抗體分別于1975年和1984年問(wèn)世。一個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，抗體作為體內(nèi)最奇妙的蛋白質(zhì)分子，一直是生命科學(xué)，尤其是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，為人類(lèi)多種疾病的預(yù)防、診斷和治療做出了巨大貢獻(xiàn)。早年人工制備抗體的方法主要是以相應(yīng)抗原免疫動(dòng)物，獲得抗血清。由于抗原常常含有
2、多種不同的抗原表位，加之所獲得的抗血清也未經(jīng)免疫純化，因此，獲得的抗血清實(shí)際上是含多種抗體的混合物，即多克隆抗體(polyclonalantibody)。用于制備抗血清的動(dòng)物也因抗體需求量的增加而從小鼠、大鼠、兔、羊到馬等大動(dòng)物。為了獲得大量的、高特異性、均質(zhì)的抗體，1975年，Kohler和Milstein建立了體外細(xì)胞融合技術(shù)，獲得了免疫小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞，大規(guī)模地制備出高特異性的單克隆抗體(monoclonalantibody，簡(jiǎn)稱(chēng)單抗)。此后，單抗在理論和實(shí)踐上的應(yīng)用，成了解決生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多重大問(wèn)題的重要手段。然而其中仍有問(wèn)題有待解決，例如在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)，作為異
3、源蛋白的單抗會(huì)引起人抗小鼠抗體反應(yīng)(humananti-mouseantibodyresponse，HAMA)。隨著DNA操作和基因工程技術(shù)的發(fā)展，使得人們已有可能對(duì)抗體基因進(jìn)行拆裝和改建，發(fā)展出種種適合不同需求的基因工程抗體及其改型抗體。由于抗體在為人類(lèi)疾病的預(yù)防、診斷和治療等等方面做出了巨大貢獻(xiàn)，世界各國(guó)對(duì)抗體研究都很重視。相信隨著對(duì)抗體的不斷更加深入的研究，人們對(duì)優(yōu)質(zhì)抗體的需求量會(huì)逐步增加，抗體的生產(chǎn)研究在未來(lái)會(huì)變得更加朝陽(yáng)。二、武漢愛(ài)博泰克生物科技公司簡(jiǎn)介武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司坐落在武漢光谷生物城，一直致力于提供專(zhuān)業(yè)的多克隆與單克隆抗體制備服務(wù)以及診斷試劑盒研發(fā)等服務(wù)，是一家開(kāi)
4、發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售抗體及診斷試劑的生物技術(shù)公司。公司已擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富的多能型技術(shù)研發(fā)人才隊(duì)伍和優(yōu)秀的管理團(tuán)隊(duì)，擁有強(qiáng)大的產(chǎn)品生產(chǎn)線(xiàn)。愛(ài)博泰克生物主要服務(wù)于生物科研與醫(yī)藥市場(chǎng)，免疫動(dòng)物種類(lèi)包括小鼠、大白兔、大鼠、雞、山羊和綿羊等。公司目前已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)了抗體的通量生產(chǎn)，擁有國(guó)內(nèi)最專(zhuān)業(yè)的基因組文庫(kù)，目標(biāo)是每一個(gè)人類(lèi)基因?qū)?yīng)一個(gè)全長(zhǎng)基因，一個(gè)高表達(dá)克隆和一個(gè)成功制備的抗體。正準(zhǔn)備向全球提供高通量的人類(lèi)基因組抗體，同時(shí)提供人類(lèi)15000個(gè)全長(zhǎng)基因cDNA文庫(kù)及其他克隆產(chǎn)品、載體構(gòu)建、蛋白表達(dá)、多肽合成、多肽藕聯(lián)、動(dòng)物免疫、抗原親和純化、Western-Blot、免疫組化IHC、全基因合成等技術(shù)服務(wù)。一、
5、工作崗位分析公司現(xiàn)階段主要從事與多抗和單抗的高通量生產(chǎn)，總的生產(chǎn)流程包括：表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建-抗原蛋白的表達(dá)和純化-免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物-殺實(shí)驗(yàn)收集抗血清-抗體的純化-抗體的檢測(cè)我在公司實(shí)驗(yàn)室里主要從事分子克隆部分（表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建）的工作：提取質(zhì)粒、質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、表達(dá)載體的構(gòu)建等等。一下是我在實(shí)驗(yàn)室工作的一些具體內(nèi)容。1、質(zhì)粒的提?。ㄊ褂肁XYGEN公司的小抽質(zhì)粒試劑盒）(1)從平板上挑取單菌落或搖甘油菌（50-100μL），接種于3ml的LB液體培養(yǎng)基中（加入相應(yīng)的抗生素,如Ampicillin、Kanamycin等），37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。(2)取2.5ml的菌液于2.5ml的已經(jīng)滅菌的EP管中，120
6、00rpm離心2min，棄上清后在濾紙上扣干。(3)加入250μL溶液S1，在渦旋振蕩器上振蕩使菌體充分懸浮，不能留有沉淀。(4)加入250μL溶液S2，立即輕輕翻轉(zhuǎn)3-5次，使溶液Ⅱ充分與菌體接觸，，使菌體裂解充分，該過(guò)程可觀(guān)察到原渾濁的菌懸浮液變清變粘。（5）加入350μL溶液S3，立即上下顛倒充分混勻7-10次，不宜太劇烈，避免斷裂的基因組DNA污染?？捎^(guān)察到白色絮狀物出現(xiàn)。（6）12000rpm離心6-8min，使白色絮狀物完全沉淀在EP管。吸取上清液至吸附柱（注意：不要吸取沉淀，避免沉淀堵塞吸附膜），12000rpm離心1min.（7）倒掉濾液，向吸附柱加入500μLS1，1200
7、0rpm離心1min再次倒掉濾液，向吸附柱加入700μLS2，12000rpm離心2min，倒掉濾液（重復(fù)2次）（8）將吸附柱放回EP管，1200rpm離心4min，盡量除去殘余乙醇（9）將吸附柱放在新的EP管上，靜止3min，使乙醇揮發(fā)。然后向?yàn)V膜中間加入40μl純凈水，1200rpm濾液即為質(zhì)粒溶液，取2μL電泳檢測(cè)，其余-20℃冷藏備用。質(zhì)粒電泳圖片：1、亞克隆用限制性酶切或PCR等手段從已經(jīng)克隆的DN
