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1、清上瀉火湯水提取物對大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)舒張作用及機(jī)制【摘要】目的探討清上瀉火湯水提取物對大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用及其機(jī)制。方法建立大鼠離體主動(dòng)脈環(huán)灌流模型，觀察清上瀉火湯水提取物對l.Onmol/L苯腎上腺素(PE)預(yù)收縮的內(nèi)皮完整血管環(huán)和去內(nèi)皮血管環(huán)的舒張作用，并觀察左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)和亞甲藍(lán)(MB)預(yù)處理對清上瀉火湯水提取物的舒張血管作用的影響。結(jié)果清上瀉火湯水提取物(1.0,3.Omg/ml)對大鼠離體內(nèi)皮完整胸主動(dòng)脈環(huán)具有濃度依賴性的舒張作用；左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)(0.lmmol/L)和亞甲藍(lán)(
2、MB)(10umol/L)預(yù)處理可抑制清上瀉火湯水提取物的舒張作用。結(jié)論清上瀉火湯提取物對大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)具有內(nèi)皮依賴性舒張血管作用，其可能機(jī)制是主要通過NO-cGMP途徑介導(dǎo)?！娟P(guān)鍵詞】血管舒張；清上瀉火湯；主動(dòng)脈，胸；大鼠清上瀉火湯記載于《方藥合編》[1],文獻(xiàn)報(bào)道清上瀉火湯主治熱厥頭痛、高血壓和高血脂等功效[2-3],但清上瀉火湯對血管的舒張作用及機(jī)制研究目前尚不多見?本研究擬通過大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)實(shí)驗(yàn)觀察清上瀉火湯水提取物對血管的作用，并初步探討其相關(guān)的作用機(jī)制。1材料清上瀉火湯方藥組成：柴胡3.75g,羌活3.OOg,黃苓2
3、.62g,知母2.62g,黃柏1.87g,灸甘草1.87g,黃茂1.87g,生地黃1.50g,黃連1.50g,藁本1.50g,升麻1.31g,防風(fēng)1.31g,蔓荊子1.12g,當(dāng)歸1.12g,蒼術(shù)1.12g,細(xì)辛1.12g,荊芥0.75g,Jl
4、<0.75g,甘草0.75g,紅花0.37go準(zhǔn)確稱取該方藥318.2g,加入蒸館水2L,在80°C溫度煮沸2h,過濾減壓濃縮干燥而得55.0g粉末?苯腎上腺素(phenylephrine,PE)、乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)、左旋硝基精氨酸甲酯(Ns-nitro-L-argi
5、ninemethylester,L-NAME)和亞甲藍(lán)(methyleneblue，MB)均為美國Sigma公司產(chǎn)品(SigmaChemicalCo.,St.Louis,MO,USA)O其余試劑為市售分析純?實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用SD大鼠，雄性，體重為250-300g,由延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供?生理性營養(yǎng)液成分(Kreb^s營養(yǎng)液)為氯化鈉115.Omniol/L、氯化鉀4.7mmol/L>氯化鈣2.5mmol/L>氯化鎂1.2mmol/L>碳酸氫鈉25.Ommol/L.磷酸二氫鈉1.2mniol/L和葡萄糖10.0mmol/L組成。p
6、H值為7.4.SQG-4型四腔器官浴槽系統(tǒng)、HSS-1(B)型恒溫浴槽及RM6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)均為成都儀器廠產(chǎn)品。2方法與結(jié)果2.1大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的制作腹腔注射給予大鼠3g/L戊巴比妥鈉50mg/kg,待麻醉后打開胸腔，迅速分離胸主動(dòng)脈。將取下的胸主動(dòng)脈置入4°C的Kreb's營養(yǎng)液中，小心去除血管周圍的脂肪及結(jié)締組織，將動(dòng)脈剪成4mm長的血管環(huán)，操作過程中避免過度牽拉，以防損傷內(nèi)皮。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，去除血管內(nèi)皮時(shí)，使用小銀子輕輕地磨擦血管環(huán)內(nèi)表面,以去除內(nèi)皮細(xì)胞?將血管環(huán)懸掛于經(jīng)37工預(yù)熱的容量為20mL的盛有K
7、reb,s營養(yǎng)液的浴槽內(nèi)，一端固定，另一端通過張力換能器連接至RM6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)，持續(xù)通以含有95mL/L氧和5mL/L二氧化碳的混合氣體，將靜息張力逐漸調(diào)節(jié)至2.Og,在37°C下穩(wěn)定lh,期間每15niiri換液1次?用50mmol/L氯化鉀刺激達(dá)峰值，用Kreb's營養(yǎng)液沖洗3次，以誘發(fā)血管環(huán)的最大收縮幅度。待動(dòng)脈環(huán)穩(wěn)定后，換液1次，向浴槽中加入苯腎上腺素l.Onmol/L,收縮達(dá)峰值15min后，加入乙酰膽堿1.0nmol/L,若加入乙酰膽堿后使苯腎上腺素預(yù)收縮的血管舒張60-90%,可認(rèn)為內(nèi)皮完整，反之
8、則認(rèn)為去內(nèi)皮。2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)偏差（x土sD）表示，并采用t檢驗(yàn)及ANOVA法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2.3清上瀉火湯水提取物對苯腎上腺素引起的胸主動(dòng)脈環(huán)預(yù)收縮的影響取雄性大鼠40只，隨機(jī)分為5個(gè)組，即對照組、內(nèi)皮完整清上瀉火湯水提取物大、小劑量組和去內(nèi)皮清上瀉火湯水提取物大、小劑量組，每組各為8只。剖取各組大鼠胸主動(dòng)脈制作內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈環(huán)，加入l.Onmol/L苯腎上腺素，待血管環(huán)收縮穩(wěn)定后，分別向內(nèi)皮完整清上瀉火湯水提取物大、小劑量組和去內(nèi)皮清上瀉火湯水提取物大、小劑量組的浴槽內(nèi)累計(jì)加入1.0,3.Omg/ml
9、清上瀉火湯水提取物，向?qū)φ战M內(nèi)加入20mLKreb's營養(yǎng)液,觀察血管環(huán)的舒張反應(yīng)，計(jì)算清上瀉火湯水提取物各劑量組血管環(huán)的舒張百分比。舒張百分比二(苯腎上腺素作用后血管張力-清上瀉火湯水提取物給藥后血管張力
